Għal reazzjonijiet ta' amplifikazzjoni b'suċċess, huwa neċessarju li l-komponenti individwali tar-reazzjoni jkunu preżenti fil-konċentrazzjoni korretta f'kull preparazzjoni. Barra minn hekk, huwa importanti li ma sseħħ l-ebda kontaminazzjoni.
Speċjalment meta jkollhom jiġu ssettjati ħafna reazzjonijiet, ġie stabbilit li tiġi ppreparata l-hekk imsejħa taħlita ewlenija minflok ma jiġi pipettat kull reaġent separatament f'kull reċipjent. Taħlitiet prekonfigurati huma disponibbli kummerċjalment, li fihom jiżdiedu biss komponenti speċifiċi għall-kampjun (primer) u ilma. Alternattivament, it-taħlita ewlenija tista' tiġi ppreparata minnek innifsek. Fiż-żewġ varjanti, it-taħlita tiġi mqassma lil kull reċipjent tal-PCR mingħajr template u l-kampjun individwali tad-DNA jiżdied separatament fl-aħħar.
L-użu ta’ taħlita ewlenija għandu diversi vantaġġi: L-ewwelnett, l-għadd ta’ passi ta’ pipettar wieħed jitnaqqas. B’dan il-mod, kemm ir-riskju ta’ żbalji mill-utent waqt il-pipettar kif ukoll ir-riskju ta’ kontaminazzjoni huma minimizzati u, naturalment, jiġi ffrankat il-ħin. Fil-prinċipju, il-preċiżjoni tal-pipettar hija wkoll ogħla, peress li jiġu ddożati volumi akbar. Dan huwa faċli biex tifhimha meta tiċċekkja d-dejta teknika tal-pipetti: Iktar ma jkun żgħir il-volum iddożat, iktar ikunu għoljin id-devjazzjonijiet. Il-fatt li l-preparazzjonijiet kollha ġejjin mill-istess reċipjent għandu effett pożittiv fuq l-omoġenjità (jekk imħallta sew). Dan itejjeb ukoll ir-riproduċibbiltà tal-esperimenti.
Meta tipprepara t-taħlita ewlenija, għandu jiżdied mill-inqas 10% volum żejjed (eż. jekk ikunu meħtieġa 10 preparazzjonijiet, ikkalkula fuq il-bażi ta' 11), sabiex anke l-aħħar reċipjent jimtela kif suppost. B'dan il-mod, jistgħu jiġu kkumpensati (żgħar) ineżattezzi fil-pipettar, u l-effett tat-telf tal-kampjun meta jiġu ddożati soluzzjonijiet li fihom deterġent. Id-deterġenti jinsabu f'soluzzjonijiet ta' enzimi bħal polimerasi u taħlitiet ewlenin, u jikkawżaw formazzjoni ta' ragħwa u residwi fuq il-wiċċ ta' ġewwa ta' kontenituri normali.ponot tal-pipetta.
Skont l-applikazzjoni u t-tip ta’ likwidu li għandu jiġi dispensat, għandha tintgħażel it-teknika korretta tal-pipettar (1) u għandu jintgħażel it-tagħmir xieraq. Għal soluzzjonijiet li fihom deterġenti, huma rakkomandati sistema ta’ spostament dirett jew l-hekk imsejħa ponot tal-pipetti “b’żamma baxxa” bħala alternattiva għall-pipetti b’kuxxin tal-arja. L-effett ta’Ponta tal-PIPETTA ACEhuwa bbażat fuq wiċċ partikolarment idrofobiku. Likwidi li fihom deterġenti ma jħallux film ta' residwu fuq ġewwa u barra, sabiex it-telf tas-soluzzjoni jista' jiġi minimizzat.
Minbarra d-dożaġġ eżatt tal-komponenti kollha, huwa importanti wkoll li ma sseħħ l-ebda kontaminazzjoni tal-preparazzjonijiet. Mhuwiex biżżejjed li jintużaw konsumabbli ta’ purità għolja, għaliex il-proċess tal-pipettar f’pipetta b’kuxxin tal-arja jista’ jipproduċi aerosols li jibqgħu fil-pipetta. Id-DNA li jista’ jkun fih l-aerosol jista’ jiġi trasferit minn kampjun għall-ieħor fil-pass tal-pipettar li jmiss u b’hekk iwassal għal kontaminazzjoni. Is-sistemi ta’ spostament dirett imsemmija hawn fuq jistgħu wkoll jimminimizzaw dan ir-riskju. Għal pipetti b’kuxxin tal-arja jagħmel sens li jintużaw ponot tal-filtru biex jipproteġu l-kon tal-pipetta billi jżommu t-titjir, l-aerosols u l-bijomolekuli.
Ħin tal-posta: 06 ta' Diċembru 2022