Οι αλυσιδωτές αντιδράσεις πολυμεράσης (PCR) είναι μια από τις ευρέως γνωστές μεθόδους που χρησιμοποιούνται στα εργαστήρια βιοεπιστημών.
Οι πλάκες PCR παράγονται από πλαστικά πρώτης κατηγορίας για άριστη επεξεργασία και ανάλυση των δειγμάτων ή των αποτελεσμάτων που συλλέγονται.
Έχουν λεπτά και ομοιογενή τοιχώματα για να παρέχουν ακριβή μεταφορά θερμότητας.
Κατά την προετοιμασία για εφαρμογές σε πραγματικό χρόνο, μικροσκοπικά τμήματα DNA ή RNA απομονώνονται και αποθηκεύονται σε πλάκες PCR.
Οι πλάκες PCR είναι εξαιρετικά αποτελεσματικές στη θερμική σφράγιση και περιορίζουν επίσης τη ροή θερμότητας.
Ωστόσο, όσο αποτελεσματικές και αξιόπιστες είναι οι πλάκες PCR, σφάλματα και ανακρίβειες είναι εύκολα εμφανή κατά την επεξεργασία των δειγμάτων.
Επομένως, αν ενδιαφέρεστε να αποκτήσετε ένα καλό και υψηλής ποιότηταςΠλάκες PCR.Είναι ιδανικό να επικοινωνήσετε με έναν αξιόπιστο κατασκευαστή πλακών PCR. Με αυτόν τον τρόπο, είστε σίγουροι ότι θα βρείτε την καλύτερη προσφορά.
Ακολουθούν ορισμένες προφυλάξεις που πρέπει να ακολουθήσετε για να αποφύγετε μολύνσεις αντιδραστηρίων ή δειγμάτων και να αποτρέψετε την εισαγωγή ανακριβειών στα αποτελέσματα.
Αποστείρωση του Περιβάλλοντος
Λανθασμένα θετικά ή αρνητικά αποτελέσματα προκύπτουν λόγω της παρουσίας ακαθαρσιών, γεγονός που σας κάνει να αμφιβάλλετε για τα αποτελέσματα.
Οι ακαθαρσίες και οι ρύποι εμφανίζονται σε διάφορες μορφές, όπως άσχετο DNA ή χημικά πρόσθετα, τα οποία τελικά μειώνουν την αποτελεσματικότητα και την αποδοτικότητα της αντίδρασης.
Υπάρχουν πολυάριθμοι τρόποι για να μειωθεί σημαντικά ο ρυθμός μόλυνσης της πλάκας PCR.
Η χρήση αποστειρωμένων ρυγχών φίλτρου είναι ένας άλλος χρήσιμος τρόπος για να αποτρέψετε την εισχώρηση ακαθαρσιών στα δείγματά σας μέσω των πιπετών.
Αφιερώστε ένα εντελώς καθαρό σετ εξοπλισμού, που αποτελείται από πιπέτες και βάσεις, αποκλειστικά για τη χρήση της PCR. Αυτό θα εγγυηθεί αμελητέα μεταφορά ακαθαρσιών ή ρύπων στο εργαστήριο.
Χρησιμοποιήστε χλωρίνες, αιθανόλη στις πιπέτες, τις σχάρες και τους πάγκους για να απομακρύνετε τους ρύπους.
Διαθέστε έναν δεσμευμένο χώρο για όλες τις αντιδράσεις PCR σας για να ελαχιστοποιήσετε περαιτέρω τη μόλυνση από σωματίδια.
Να χρησιμοποιείτε καθαρά γάντια σε κάθε βήμα και να τα αντικαθιστάτε συχνά.
Πλάκες PCR
Ελέγξτε τη συγκέντρωση και την καθαρότητα του προτύπου.
Θα πρέπει να διατηρείται η καθαριότητα του πάγκου και του εξοπλισμού που χρησιμοποιούνται κατά την ανάλυση δειγμάτων με την PCR. Είναι απαραίτητο να επικυρώνεται ο βαθμός καθαρότητας των δειγμάτων πριν από την ανάλυση και την επεξεργασία.
Γενικά, οι αναλυτές λαμβάνουν υπόψη τη συγκέντρωση και το επίπεδο καθαρότητας των δειγμάτων DNA.
Προσπαθήστε ο λόγος απορρόφησης για 260nm/280nm να μην είναι μικρότερος από 1,8. Ενώ τα επόμενα μήκη κύματος μεταξύ 230nm και 320nm χρησιμοποιούνται για την ταυτοποίηση των ακαθαρσιών.
Σε μια περίπτωση, τα χαοτροπικά άλατα και άλλες οργανικές ενώσεις ανιχνεύονται με ρυθμό απορρόφησης 230 nm. Ενώ η θολερότητα σε δείγματα DNA ανιχνεύεται και επαληθεύεται επίσης με ρυθμό απορρόφησης 320 nm.
Αποφύγετε την υπερφόρτωση των πλακών PCR με προϊόν
Όσο επιθυμητή και αν είναι η ταυτόχρονη εκτέλεση πολλαπλών προϊόντων, αυτό οδηγεί σε διασταυρούμενη μόλυνση των πλακών PCR.
Η υπερφόρτωση των πλακών PCR με διαφορετικά προϊόντα προκαλεί σπατάλη και καθιστά εξαιρετικά δύσκολη την εξακρίβωση της ποιότητας των δειγμάτων.
Διατήρηση αρχείων αντιδραστηρίων PCR σε υποπολλαπλάσια ποσότητα
Οι συνεχείς κύκλοι κατάψυξης/απόψυξης και η συχνή χρήση κλάσματος ενδέχεται να προκαλέσουν βλάβη στα αντιδραστήρια PCR, τα ένζυμα και τα DNTP μέσω ανακρυστάλλωσης.
Να προσπαθείτε πάντα να παρακολουθείτε την ποσότητα του χρησιμοποιούμενου κλάσματος κατά την προετοιμασία των δειγμάτων που θα αναλυθούν.
Το προτιμώμενο LIMS είναι πιο κατάλληλο για τον έλεγχο του αποθέματος και της ποσότητας των αντιδραστηρίων και των δειγμάτων που καταψύχονται ή αποψύχονται.
Επιλέξτε την καλύτερη θερμοκρασία ανόπτησης.
Η επιλογή και η χρήση λανθασμένης θερμοκρασίας ανόπτησης είναι μια ακόμη μέθοδος με την οποία τα αποτελέσματα της PCR περιέχουν σφάλματα.
Μερικές φορές, η αντίδραση δεν εξελίσσεται όπως έχει προγραμματιστεί. Είναι επιθυμητό να μειωθεί η θερμοκρασία ανόπτησης προκειμένου να διευκολυνθεί μια επιτυχημένη αντίδραση.
Ωστόσο, η μείωση της θερμοκρασίας αυξάνει τις πιθανότητες ψευδώς θετικών αποτελεσμάτων και εμφάνισης διμερών εκκινητών.
Είναι σημαντικό να επιβεβαιωθεί η ανάλυση της καμπύλης τήξης κατά τη χρήση των πλακών PCR, καθώς αποτελεί καλή ένδειξη για την επιλογή της σωστής θερμοκρασίας ανόπτησης.
Το λογισμικό σχεδιασμού εκκινητών βοηθά στον σχεδιασμό, παρέχοντας τη σωστή θερμοκρασία ανόπτησης μειώνοντας άμεσα το σφάλμα στις πλάκες PCR.
Χρειάζεστε πλάκα PCR υψηλής ποιότητας;
Σε περίπτωση που σκέφτεστε πού να βρείτε έναν αξιόπιστο κατασκευαστήΠλάκες PCRΜην ψάχνετε άλλο, επειδή βρίσκεστε στο σωστό μέρος.
Ευγενώςκάντε κλικ εδώ για να επικοινωνήσετε μαζί μαςγια προϊόντα και υπηρεσίες υψηλής ποιότητας σε τιμή που δεν θα σας εξαντλήσει.
Ώρα δημοσίευσης: 30 Οκτωβρίου 2021