Polymerase chain reactions (PCR) yog ib qho ntawm cov kev paub dav siv hauv cov chaw soj ntsuam kev ua neej.
PCR daim hlau yog tsim los ntawm thawj-chav yas yas rau kev ua haujlwm zoo thiab kev soj ntsuam ntawm cov qauv lossis cov txiaj ntsig tau sau.
Lawv muaj cov phab ntsa nyias thiab homogenous los muab cov thermal hloov pauv.
Hauv kev npaj rau lub sijhawm siv sijhawm tiag tiag, ntu ntu ntawm DNA lossis RNA raug cais tawm thiab khaws cia hauv PCR daim phiaj.
Cov PCR daim hlau muaj txiaj ntsig zoo hauv kev sib khi thaum tshav kub kub thiab txwv tsis pub khiav ntawm tshav kub thiab.
Txawm li cas los xij, raws li kev ua tau zoo thiab txhim khu kev qha PCR daim hlau yog, kev ua yuam kev thiab qhov tsis raug tau yooj yim thaum ua cov qauv.
Yog li ntawd, yog hais tias koj xav tau ib tug zoo thiab high qualityPCR daim hlau.Nws yog qhov zoo tshaj plaws hu rau PCR phaj chaw tsim khoom.Nrog rau qhov no koj paub tseeb tias tau txais qhov zoo tshaj plaws deal.
Nov yog qee qhov kev ceev faj kom ua raws li kom tsis txhob muaj kev sib kis ntawm cov tshuaj reagents lossis cov qauv thiab tiv thaiv qhov tsis raug ntawm kev nkag mus rau hauv cov txiaj ntsig.
Sterilizing Lub Ib puag ncig
Qhov tsis zoo lossis qhov tsis zoo tshwm sim vim muaj cov impurities, uas ua rau koj tsis ntseeg cov txiaj ntsig.
Cov impurities thiab cov kab mob sib kis tshwm sim nyob rau hauv ntau hom xws li DNA tsis cuam tshuam los yog tshuaj lom neeg additives uas nws thiaj li yuav txo tau cov efficiency thiab zoo ntawm cov tshuaj tiv thaiv.
Muaj ntau txoj hauv kev los txo qis tus nqi ntawm kev sib kis ntawm PCR phaj.
Siv cov lus qhia lim kom tsis muaj menyuam yog lwm txoj hauv kev los tiv thaiv impurities los ntawm kev nkag mus rau hauv koj cov qauv los ntawm cov pipettes.
Muab cov khoom siv huv huv, suav nrog cov kav dej thiab cov khib nyiab, tshwj xeeb rau kev siv PCR.Qhov no yuav lav qhov tsis raug hloov pauv ntawm cov impurities lossis cov kab mob sib kis nyob ib puag ncig ntawm chav kuaj.
Siv cov tshuaj dawb, ethanol ntawm cov kav dej, cov khib nyiab thiab cov rooj zaum kom tshem tawm cov kab mob.
Muab qhov chaw tshwj tseg rau tag nrho koj cov kev cuam tshuam PCR txhawm rau txo cov kab mob sib kis ntxiv.
Siv cov hnab looj tes huv ntawm txhua kauj ruam thiab hloov lawv ntau zaus.
PCR daim hlau
Tshawb xyuas qhov concentration thiab purity ntawm lub Template.
Kev huv ntawm lub rooj ntev zaum thiab cov cuab yeej siv thaum soj ntsuam cov qauv nrog PCR yuav tsum tau tswj xyuas.Nws yog ib qho tseem ceeb uas yuav tsum tau ua kom paub tseeb tias qib ntawm purity ntawm cov qauv ua ntej kev soj ntsuam thiab ua tiav.
Feem ntau, cov kws tshuaj ntsuam xyuas xav txog qhov concentration thiab purity theem ntawm DNA kuaj.
Endeavor qhov piv ntawm absorbance rau 260nm / 280nm yuav tsum tsis txhob tsawg tshaj li 1.8.Thaum lub wavelength tom ntej ntawm 230nm thiab 320nm yog siv los txheeb xyuas impurities.
Ntawm qhov piv txwv, chaotropic ntsev thiab lwm cov organic tebchaw raug kuaj pom ntawm 230nm absorbance tus nqi.Thaum turbidity nyob rau hauv DNA kuaj kuj kuaj thiab xyuas ntawm tus nqi absorbance ntawm 320nm.
Tsis txhob overloading PCR Phaj nrog cov khoom
Ntau npaum li nws xav tau khiav ntau yam khoom ib txhij, nws ua rau muaj kev sib kis ntawm PCR daim hlau.
Overloading PCR daim hlau nrog cov khoom sib txawv pov tseg thiab ua rau nws nyuaj heev rau kev txheeb xyuas cov qauv.
Khaws Cov Ntaub Ntawv ntawm Aliquot PCR Reagents
Nruam khov / thaw cycles thiab nquag siv aliquot tuaj yeem ua rau PCR reagents, enzymes thiab DNTP's los ntawm recrystallization.
Ib txwm sim ntsuas tus nqi ntawm aliquot siv thaum npaj cov qauv los soj ntsuam.
LIMS nyiam dua yog qhov tsim nyog los tswj cov khoom muag thiab tus nqi ntawm cov tshuaj reagents thiab cov qauv khov lossis thawed.
Xaiv qhov zoo tshaj plaws Annealing kub.
Kev xaiv thiab siv qhov ntsuas kub tsis zoo yog lwm txoj hauv kev PCR cov txiaj ntsig muaj qhov yuam kev.
Qee zaum, cov tshuaj tiv thaiv tsis mus raws li kev npaj.Nws yog xav kom txo qhov kub ntawm annealing thiaj li yuav pab tau kom muaj kev vam meej cov tshuaj tiv thaiv.
Txawm li cas los xij, txo qhov kub thiab txias yuav ua rau muaj qhov tsis zoo thiab qhov zoo ntawm primer dimers.
Nws yog ib qho tseem ceeb kom paub meej tias qhov kev tsom xam ntawm qhov nkhaus melting thaum siv PCR daim hlau vim nws yog qhov taw qhia zoo ntawm kev xaiv qhov raug qhov kub thiab txias.
Primer tsim software pab nrog tsim, muab txoj cai annealing kub nrog ncaj qha txo qhov yuam kev hauv PCR daim hlau.
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Post lub sij hawm: Oct-30-2021