Polymerase chain reactions (PCR) သည် သက်ရှိသိပ္ပံဓာတ်ခွဲခန်းများတွင် အသုံးများသော လူသိများသော နည်းလမ်းများထဲမှ တစ်ခုဖြစ်သည်။
PCR ပြားများကို နမူနာများ သို့မဟုတ် ကောက်ယူထားသော ရလဒ်များကို ကောင်းမွန်စွာ လုပ်ဆောင်ခြင်းနှင့် ခွဲခြမ်းစိတ်ဖြာခြင်းတို့အတွက် ပထမတန်းစား ပလတ်စတစ်များမှ ထုတ်လုပ်ပါသည်။
၎င်းတို့တွင် တိကျသော အပူလွှဲပြောင်းပေးရန်အတွက် ပါးလွှာပြီး တစ်သားတည်းကျသော နံရံများရှိသည်။
အချိန်နှင့်တပြေးညီ အသုံးချပရိုဂရမ်များအတွက် ပြင်ဆင်မှုတွင်၊ DNA သို့မဟုတ် RNA ၏ မိနစ်ပိုင်းအပိုင်းကို PCR ပြားများတွင် သီးသန့်ထားပြီး သိမ်းဆည်းထားသည်။
PCR ပြားများသည် အပူပိတ်ခြင်းအတွက် အလွန်ထိရောက်ပြီး အပူစီးဆင်းမှုကိုလည်း ကန့်သတ်ထားသည်။
သို့သော်၊ ထိရောက်ပြီး ယုံကြည်စိတ်ချရသော PCR ပြားများသည် နမူနာများကို လုပ်ဆောင်နေစဉ်တွင် အမှားအယွင်းများနှင့် မှားယွင်းမှုများသည် အလွယ်တကူ ရပ်တန့်သွားနိုင်သည်။
ဒါကြောင့် အရည်အသွေးမြင့်တဲ့ ပစ္စည်းကောင်းကို လိုချင်ရင်၊PCR ပြားများ။ယုံကြည်စိတ်ချရသော PCR ပြားထုတ်လုပ်သူထံ ဆက်သွယ်ရန် အကောင်းဆုံးဖြစ်သည်။ဤအရာဖြင့် သင်သည် အကောင်းဆုံး သဘောတူညီချက်ကို ရရှိရန် အာမခံပါသည်။
ဤအရာများသည် ဓာတ်ပစ္စည်းများ သို့မဟုတ် နမူနာများ ညစ်ညမ်းခြင်းများကို ရှောင်ရှားရန်နှင့် ရလဒ်များအတွင်းသို့ စိမ့်ဝင်သွားခြင်းမှ ကာကွယ်ရန် အချို့သော ကြိုတင်ကာကွယ်မှုများဖြစ်သည်။
ပတ်ဝန်းကျင်ကို ပိုးသတ်ခြင်း။
အညစ်အကြေးများ ရှိနေခြင်းကြောင့် မှားယွင်းသော အပြုသဘော သို့မဟုတ် အနုတ်လက္ခဏာများ ဖြစ်ပေါ်ပြီး ရလဒ်များကို သံသယဖြစ်စေသည်။
အညစ်အကြေးများနှင့် ညစ်ညမ်းမှုများသည် နောက်ဆုံးတွင် တုံ့ပြန်မှု၏ထိရောက်မှုနှင့် ထိရောက်မှုကို လျော့နည်းစေသည့် မသက်ဆိုင်သော DNA သို့မဟုတ် ဓာတုဗေဒပစ္စည်းများကဲ့သို့သော ပုံစံအမျိုးမျိုးဖြင့် ဖြစ်ပေါ်သည်။
PCR ပြား၏ညစ်ညမ်းမှုနှုန်းကိုလျှော့ချရန်နည်းလမ်းများစွာရှိသည်။
ပိုးသတ်ထားသော filter အကြံပြုချက်များကိုအသုံးပြုခြင်းသည် pipettes များမှတဆင့် သင့်နမူနာများထဲသို့ အညစ်အကြေးများဝင်ရောက်ခြင်းမှကာကွယ်ရန် နောက်ထပ်အသုံးဝင်သောနည်းလမ်းဖြစ်သည်။
PCR အသုံးပြုရန်အတွက် သီးသန့် ပိုက်ပက်များနှင့် စင်များပါ၀င်သော လုံးဝသန့်ရှင်းသော ကိရိယာအစုံကို မြှုပ်နှံပါ။၎င်းသည် ဓာတ်ခွဲခန်းတစ်ဝိုက်ရှိ အညစ်အကြေးများ သို့မဟုတ် ညစ်ညမ်းမှုများအား နည်းပါးစွာ လွှဲပြောင်းပေးမည်ဟု အာမခံပါသည်။
ညစ်ညမ်းမှုများကို ဖယ်ရှားရန်အတွက် ပိုက်ပက်များ၊ စင်များနှင့် ခုံတန်းများပေါ်ရှိ အရောင်ချွတ်ဆေးများ၊ အီသနောကို အသုံးပြုပါ။
အမှုန်အမွှားများ ညစ်ညမ်းမှုကို ထပ်မံလျှော့ချရန်အတွက် သင်၏ PCR တုံ့ပြန်မှုအားလုံးအတွက် သီးသန့်နေရာတစ်ခုကို ခွဲဝေပေးပါ။
သန့်ရှင်းသော လက်အိတ်များကို အဆင့်တိုင်းတွင် အသုံးပြုပြီး ၎င်းတို့ကို မကြာခဏ အစားထိုးပါ။
PCR ပြားများ
Template ၏ အာရုံစူးစိုက်မှုနှင့် သန့်ရှင်းမှုကို စစ်ဆေးပါ။
PCR ဖြင့် နမူနာများကို ခွဲခြမ်းစိတ်ဖြာရာတွင် အသုံးပြုသည့် ခုံတန်းလျားနှင့် ပစ္စည်းများ၏ သန့်ရှင်းမှုကို ထိန်းသိမ်းထားသင့်သည်။ခွဲခြမ်းစိတ်ဖြာခြင်းနှင့် လုပ်ဆောင်ခြင်းမပြုမီ နမူနာများ၏ သန့်စင်မှုအတိုင်းအတာကို အတည်ပြုရန် အရေးကြီးပါသည်။
ယေဘုယျအားဖြင့်၊ ခွဲခြမ်းစိတ်ဖြာသူများသည် DNA နမူနာများ၏ အာရုံစူးစိုက်မှုနှင့် သန့်စင်မှုအဆင့်ကို ထည့်သွင်းစဉ်းစားသည်။
260nm/280nm အတွက် စုပ်ယူမှုအချိုးသည် 1.8 ထက် မနည်းစေရပါ။230nm နှင့် 320nm အကြား နောက်ဆက်တွဲလှိုင်းအလျားကို အညစ်အကြေးများကို ခွဲခြားသတ်မှတ်ရန် အသုံးပြုပါသည်။
ဥပမာအားဖြင့်၊ chaotropic ဆားများနှင့် အခြားအော်ဂဲနစ်ဒြပ်ပေါင်းများကို 230nm စုပ်ယူမှုနှုန်းဖြင့် တွေ့ရှိသည်။DNA နမူနာများတွင် turbidity ကို 320nm ၏ စုပ်ယူမှုနှုန်းဖြင့်လည်း ရှာဖွေတွေ့ရှိပြီး အတည်ပြုပါသည်။
ထုတ်ကုန်နှင့်အတူ PCR ပန်းကန်ပြားများ လွန်ကဲနေခြင်းကို ရှောင်ကြဉ်ပါ။
ထုတ်ကုန်များစွာကို တစ်ပြိုင်နက်တည်း လုပ်ဆောင်လိုသည်နှင့်အမျှ ၎င်းသည် PCR ပြားများကို ဖြတ်ကျော်ညစ်ညမ်းစေပါသည်။
မတူညီသောထုတ်ကုန်များဖြင့် PCR ပြားများကို လွန်ကဲစွာတင်ခြင်းသည် ဖြုန်းတီးပြီးနမူနာများကို အတည်ပြုရန် အလွန်ခက်ခဲစေသည်။
Aliquot PCR ဓာတ်ပစ္စည်းများ၏ မှတ်တမ်းများကို သိမ်းဆည်းပါ။
အဆက်မပြတ် အေးခဲခြင်း/ပျော်ဝင်ခြင်း သံသရာနှင့် aliquot ကို မကြာခဏအသုံးပြုခြင်းသည် ပြန်လည်ပုံသွင်းခြင်းမှတစ်ဆင့် PCR ဓာတ်ပစ္စည်းများ၊ အင်ဇိုင်းများနှင့် DNTP တို့ကို ပျက်စီးစေနိုင်သည်။
နမူနာများကို ခွဲခြမ်းစိတ်ဖြာရန် ပြင်ဆင်နေချိန်တွင် အသုံးပြုသည့် aliquot နှုန်းကို အမြဲစောင့်ကြည့်ရန် အမြဲကြိုးစားပါ။
ဦးစားပေးနိုင်သော LIMS သည် သိုလှောင်မှုအား ထိန်းချုပ်ရန်နှင့် အေးခဲသော သို့မဟုတ် ရောထားသော ဓာတ်ပြုမှုပမာဏနှင့် နမူနာများကို ထိန်းချုပ်ရန် ပိုသင့်တော်ပါသည်။
အကောင်းဆုံး Annealing Temperature ကို ရွေးပါ။
မှားယွင်းသော အပူချိန်ကို ကောက်ယူခြင်းနှင့် အသုံးပြုခြင်းသည် PCR ရလဒ်များတွင် အမှားအယွင်း ပါ၀င်သည့် အခြားနည်းလမ်းတစ်ခုဖြစ်သည်။
တခါတရံတွင် တုံ့ပြန်မှုသည် စီစဉ်ထားသည့်အတိုင်း မသွားနိုင်ပါ။အောင်မြင်သောတုံ့ပြန်မှုလွယ်ကူစေရန်အတွက် annealing temperature ကိုလျှော့ချလိုသည်။
သို့သော်လည်း အပူချိန်ကို လျှော့ချခြင်းသည် မှားယွင်းသော အပြုသဘောများနှင့် primer dimers အသွင်အပြင် ဖြစ်နိုင်ခြေကို တိုးစေသည်။
မှန်ကန်သော annealing အပူချိန်ကိုရွေးချယ်ခြင်းအတွက် ကောင်းမွန်သောညွှန်ပြချက်ဖြစ်သောကြောင့် PCR ပြားများကိုအသုံးပြုသည့်အခါ အရည်ပျော်မျဉ်းကြောင်းခွဲခြမ်းစိတ်ဖြာချက်ကို အတည်ပြုရန် အရေးကြီးပါသည်။
Primer ဒီဇိုင်းဆော့ဖ်ဝဲလ်သည် PCR ပြားများတွင် အမှားအယွင်းများကို တိုက်ရိုက်လျော့ချပေးခြင်းဖြင့် မှန်ကန်သော အနွေးဓာတ်ပေးသည့် အပူချိန်ကို ဒီဇိုင်းဆွဲခြင်းဖြင့် ကူညီပေးသည်။
အရည်အသွေးမြင့် PCR ပြားတစ်ခု လိုအပ်နေပါသလား။
အကယ်၍ သင်သည် ယုံကြည်စိတ်ချရသော ထုတ်လုပ်သူအား မည်သည့်နေရာတွင် ရှာဖွေရန် စဉ်းစားနေသနည်း။PCR ပြားများ.နေရာမှန်မှာရှိလို့ မရှာတော့ဘူး။
ကြင်နာစွာကျွန်ုပ်တို့ကို ဆက်သွယ်ရန် ဤနေရာကိုနှိပ်ပါ။ဘဏ်ကိုမထိခိုက်စေဘဲ အရည်အသွေးမြင့်ထုတ်ကုန်များနှင့် ဝန်ဆောင်မှုများအတွက်။
စာတိုက်အချိန်- အောက်တိုဘာ-၃၀-၂၀၂၁