Để phản ứng khuếch đại thành công, cần phải có các thành phần phản ứng riêng lẻ có nồng độ chính xác trong mỗi lần chuẩn bị. Ngoài ra, điều quan trọng là không xảy ra hiện tượng nhiễm bẩn.
Đặc biệt khi phải thiết lập nhiều phản ứng, người ta đã thiết lập một hỗn hợp chính thay vì phải nhỏ từng thuốc thử riêng lẻ vào từng bình. Các hỗn hợp được định cấu hình sẵn có sẵn trên thị trường, trong đó chỉ thêm các thành phần cụ thể của mẫu (mồi) và nước. Ngoài ra, bạn có thể tự chuẩn bị hỗn hợp chính. Trong cả hai biến thể, hỗn hợp được phân phối đến từng bình PCR mà không cần khuôn mẫu và mẫu DNA riêng lẻ được thêm riêng vào cuối.
Sử dụng hỗn hợp chính có một số lợi thế: Đầu tiên, số bước hút đơn lẻ được giảm bớt. Theo cách này, cả rủi ro do lỗi của người dùng trong quá trình hút và rủi ro nhiễm bẩn đều được giảm thiểu và tất nhiên, tiết kiệm được thời gian. Về nguyên tắc, độ chính xác của hút cũng cao hơn, vì thể tích được định lượng lớn hơn. Điều này dễ hiểu khi kiểm tra dữ liệu kỹ thuật của pipet: Thể tích định lượng càng nhỏ thì độ lệch có thể càng cao. Thực tế là tất cả các chế phẩm đều đến từ cùng một bình có tác động tích cực đến tính đồng nhất (nếu được trộn đều). Điều này cũng cải thiện khả năng tái tạo của các thí nghiệm.
Khi chuẩn bị hỗn hợp chính, cần thêm ít nhất 10% thể tích (ví dụ nếu cần 10 lần pha chế, hãy tính toán trên cơ sở 11), để ngay cả bình cuối cùng cũng được đổ đầy đúng cách. Theo cách này, có thể bù đắp được những sai sót nhỏ (nhỏ) khi hút và tác động của việc mất mẫu khi định lượng dung dịch chứa chất tẩy rửa. Chất tẩy rửa có trong các dung dịch enzyme như polymerase và hỗn hợp chính, gây ra sự hình thành bọt và cặn trên bề mặt bên trong của bình thườngđầu pipet.
Tùy thuộc vào ứng dụng và loại chất lỏng cần phân phối, nên chọn kỹ thuật hút pipet đúng (1) và chọn thiết bị phù hợp. Đối với các dung dịch có chứa chất tẩy rửa, nên sử dụng hệ thống dịch chuyển trực tiếp hoặc cái gọi là đầu hút pipet “giữ lại thấp” thay thế cho pipet đệm khí. Hiệu ứng củaĐầu ACE PIPETTEdựa trên bề mặt đặc biệt kỵ nước. Chất lỏng có chứa chất tẩy rửa không để lại lớp màng cặn ở bên trong và bên ngoài, do đó có thể giảm thiểu tối đa tình trạng mất dung dịch.
Bên cạnh việc định lượng chính xác tất cả các thành phần, điều quan trọng nữa là không để xảy ra tình trạng nhiễm bẩn các chế phẩm. Chỉ sử dụng vật tư tiêu hao có độ tinh khiết cao là chưa đủ, vì quá trình hút mẫu bằng pipet đệm khí có thể tạo ra các khí dung còn sót lại trong pipet. DNA có thể có trong khí dung có thể được chuyển từ mẫu này sang mẫu khác trong bước hút mẫu tiếp theo và do đó dẫn đến nhiễm bẩn. Các hệ thống dịch chuyển trực tiếp được đề cập ở trên cũng có thể giảm thiểu rủi ro này. Đối với pipet đệm khí, nên sử dụng đầu lọc để bảo vệ đầu pipet bằng cách giữ lại các giọt bắn, khí dung và các phân tử sinh học.
Thời gian đăng: 06-12-2022