As reações em cadeia da polimerase (PCR) são um dos métodos amplamente conhecidos usados em laboratórios de ciências biológicas.
As placas de PCR são produzidas com plásticos de primeira classe para excelente processamento e análise de amostras ou resultados coletados.
Possuem paredes finas e homogêneas para proporcionar transferência térmica precisa.
Em preparação para aplicações em tempo real, pequenas seções de DNA ou RNA são isoladas e armazenadas em placas de PCR.
As placas PCR são altamente eficientes na selagem a quente e também restringem o fluxo de calor.
Entretanto, por mais eficazes e confiáveis que sejam as placas de PCR, erros e imprecisões podem surgir facilmente durante o processamento das amostras.
Portanto, se você está interessado em obter um produto bom e de alta qualidadePlacas de PCR.O ideal é entrar em contato com um fabricante confiável de placas de PCR. Assim, você terá a garantia de fazer o melhor negócio.
Aqui estão algumas precauções a serem seguidas para evitar contaminações de reagentes ou amostras e impedir que imprecisões apareçam nos resultados.
Esterilizando o ambiente
Positivos ou negativos incorretos ocorrem devido à presença de impurezas, o que faz você duvidar dos resultados.
Impurezas e contaminantes ocorrem em várias formas, como DNA não relacionado ou aditivos químicos, que acabam diminuindo a eficiência e a eficácia da reação.
Existem inúmeras maneiras de reduzir significativamente a taxa de contaminação da placa de PCR.
Usar pontas de filtro esterilizadas é outra maneira útil de evitar que impurezas penetrem nas amostras através das pipetas.
Dedique um conjunto de equipamentos completamente limpos, incluindo pipetas e racks, exclusivamente para o uso de PCR. Isso garantirá transferência mínima de impurezas ou contaminantes pelo laboratório.
Utilize alvejantes e etanol nas pipetas, racks e bancadas para limpar contaminantes.
Reserve um espaço para todas as suas reações de PCR para minimizar ainda mais a contaminação por partículas.
Use luvas limpas em cada etapa e troque-as com frequência.
Placas de PCR
Inspecione a concentração e a pureza do modelo.
A limpeza da bancada e dos equipamentos utilizados na análise de amostras por PCR deve ser mantida. É essencial validar o grau de pureza das amostras antes da análise e do processamento.
Geralmente, os analisadores levam em consideração a concentração e o nível de pureza das amostras de DNA.
Esforce-se para que a razão de absorbância para 260 nm/280 nm não seja inferior a 1,8. Enquanto comprimentos de onda subsequentes entre 230 nm e 320 nm são usados para identificar impurezas.
Em um exemplo, sais caotrópicos e outros compostos orgânicos são detectados a uma taxa de absorbância de 230 nm. Enquanto a turbidez em amostras de DNA também é detectada e verificada a uma taxa de absorbância de 320 nm.
Evite sobrecarregar as placas de PCR com o produto
Por mais que seja desejado executar vários produtos simultaneamente, isso resulta em contaminação cruzada das placas de PCR.
Sobrecarregar as placas de PCR com diferentes produtos desperdiça e torna extremamente difícil a determinação das amostras.
Manter registros de reagentes de PCR de alíquota
Ciclos contínuos de congelamento/degelo e o uso frequente de alíquotas podem danificar os reagentes de PCR, enzimas e DNTPs por meio da recristalização.
Procure sempre monitorar a taxa de alíquota utilizada ao preparar amostras a serem analisadas.
O LIMS preferível é mais adequado para controlar o inventário e a quantidade de reagentes e amostras congeladas ou descongeladas.
Escolha a melhor temperatura de recozimento.
Selecionar e usar a temperatura de recozimento errada é outro método pelo qual os resultados da PCR contêm erros.
Às vezes, a reação não ocorre conforme o planejado. É desejável reduzir a temperatura de recozimento para facilitar o sucesso da reação.
Entretanto, diminuir a temperatura aumenta as chances de falsos positivos e aparecimento de dímeros de primer.
É importante confirmar a análise da curva de fusão ao usar placas de PCR, pois é um bom indicador para selecionar a temperatura de recozimento correta.
O software de design de primer auxilia no design e no fornecimento da temperatura correta de recozimento, o que reduz diretamente os erros nas placas de PCR.
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Data de publicação: 30 de outubro de 2021