सफल प्रवर्धन प्रतिक्रियाहरूको लागि, प्रत्येक तयारीमा व्यक्तिगत प्रतिक्रिया घटकहरू सही सांद्रतामा उपस्थित हुनु आवश्यक छ। यसको अतिरिक्त, यो महत्त्वपूर्ण छ कि कुनै पनि प्रदूषण नहोस्।
विशेष गरी जब धेरै प्रतिक्रियाहरू सेट-अप गर्नुपर्ने हुन्छ, प्रत्येक भाँडामा प्रत्येक अभिकर्मकलाई छुट्टाछुट्टै पाइपेट गर्नुको सट्टा तथाकथित मास्टर मिक्स तयार गर्ने स्थापना गरिएको छ। पूर्व-कन्फिगर गरिएका मिश्रणहरू व्यावसायिक रूपमा उपलब्ध छन्, जसमा केवल नमूना-विशिष्ट घटकहरू (प्राइमर) र पानी थपिन्छन्। वैकल्पिक रूपमा, मास्टर मिक्स आफैंले तयार गर्न सकिन्छ। दुबै भेरियन्टहरूमा, मिश्रण प्रत्येक PCR भाँडामा टेम्प्लेट बिना वितरण गरिन्छ र व्यक्तिगत DNA नमूना अन्त्यमा छुट्टै थपिन्छ।
मास्टर मिक्स प्रयोग गर्दा धेरै फाइदाहरू छन्: पहिलो, एकल पाइपेटिङ चरणहरूको संख्या कम हुन्छ। यस तरिकाले, पाइपेटिङको क्रममा प्रयोगकर्ता त्रुटिहरूको जोखिम र प्रदूषणको जोखिम दुवै कम हुन्छ र अवश्य पनि, समय बचत हुन्छ। सिद्धान्तमा, पाइपेटिङ शुद्धता पनि उच्च हुन्छ, किनकि ठूला भोल्युमहरू डोज गरिन्छ। पिपेटहरूको प्राविधिक डेटा जाँच गर्दा यो बुझ्न सजिलो छ: डोज गरिएको भोल्युम जति सानो हुन्छ, विचलनहरू त्यति नै उच्च हुन सक्छन्। सबै तयारीहरू एउटै भाँडाबाट आउने तथ्यले एकरूपतामा सकारात्मक प्रभाव पार्छ (यदि राम्रोसँग मिसाइयो भने)। यसले प्रयोगहरूको पुनरुत्पादन क्षमतामा पनि सुधार गर्छ।
मास्टर मिक्स तयार गर्दा, कम्तिमा १०% अतिरिक्त भोल्युम थप्नुपर्छ (जस्तै यदि १० वटा तयारी आवश्यक छ भने, ११ को आधारमा गणना गर्नुहोस्), ताकि अन्तिम भाँडो पनि राम्ररी भरियोस्। यसरी, (थोरै) पाइपेटिङ अशुद्धताहरू, र डिटर्जेन्ट-युक्त समाधानहरूको मात्रा दिँदा नमूना हानिको प्रभावलाई क्षतिपूर्ति गर्न सकिन्छ। डिटर्जेन्टहरू पोलिमरेज र मास्टर मिक्स जस्ता इन्जाइम समाधानहरूमा समावेश हुन्छन्, जसले गर्दा फोम गठन हुन्छ र सामान्यको भित्री सतहमा अवशेषहरू हुन्छन्।पिपेट टिप्स.
प्रयोग र वितरण गरिने तरल पदार्थको प्रकारमा निर्भर गर्दै, सही पाइपेटिङ प्रविधि (१) छनौट गर्नुपर्छ र उपयुक्त उपकरण चयन गर्नुपर्छ। डिटर्जेन्टहरू भएको समाधानको लागि, एयर-कुशन पाइपेटहरूको विकल्पको रूपमा प्रत्यक्ष विस्थापन प्रणाली वा तथाकथित "कम रिटेन्सन" पाइपेट टिपहरू सिफारिस गरिन्छ। को प्रभावACE PIPETTE टिपविशेष गरी हाइड्रोफोबिक सतहमा आधारित छ। डिटर्जेन्टहरू भएको तरल पदार्थले भित्र र बाहिर अवशेषको फिल्म छोड्दैन, जसले गर्दा घोलको क्षति कम गर्न सकिन्छ।
सबै कम्पोनेन्टहरूको सही मात्रा निर्धारण गर्नुको साथै, तयारीहरूमा कुनै पनि प्रकारको दूषितता नहोस् भन्ने कुरा पनि महत्त्वपूर्ण छ। उच्च शुद्धता भएका उपभोग्य वस्तुहरू प्रयोग गर्नु पर्याप्त छैन, किनभने एयर कुशन पिपेटमा पाइपेटिङ प्रक्रियाले पिपेटमा रहने एरोसोलहरू उत्पादन गर्न सक्छ। एरोसोलमा समावेश हुन सक्ने डीएनएलाई निम्न पाइपेटिङ चरणमा एउटा नमूनाबाट अर्कोमा स्थानान्तरण गर्न सकिन्छ र यसरी दूषित हुन सक्छ। माथि उल्लेखित प्रत्यक्ष विस्थापन प्रणालीहरूले पनि यो जोखिमलाई कम गर्न सक्छन्। एयर-कुशन पिपेटहरूको लागि स्प्ल्याश, एरोसोल र बायोमोलिक्युलहरू राखेर पिपेट कोनलाई सुरक्षित राख्न फिल्टर टिप्सहरू प्रयोग गर्नु अर्थपूर्ण हुन्छ।
पोस्ट समय: डिसेम्बर-०६-२०२२