Pou reyaksyon anplifikasyon yo reyisi, li nesesè pou chak konpozan reyaksyon yo prezan nan konsantrasyon ki kòrèk la nan chak preparasyon. Anplis de sa, li enpòtan pou pa gen okenn kontaminasyon ki rive.
Sitou lè anpil reyaksyon dwe mete an plas, li te etabli pou prepare yon melanj mèt olye pou yo pipete chak reyaktif separeman nan chak veso. Melanj prekonfigure disponib nan komès, kote yo ajoute sèlman konpozan espesifik echantiyon an (primer) ak dlo. Altènativman, ou ka prepare melanj mèt la poukont ou. Nan tou de varyant yo, melanj lan distribye nan chak veso PCR san yon modèl epi yo ajoute echantiyon ADN endividyèl la separeman nan fen an.
Itilizasyon yon melanj prensipal gen plizyè avantaj: Premyèman, kantite etap pipete endividyèl yo redwi. Nan fason sa a, tou de risk pou erè itilizatè a pandan pipete a ak risk kontaminasyon an minimize epi, nan kou, yo ekonomize tan. An prensip, presizyon pipete a pi wo tou, paske yo doze pi gwo volim. Sa fasil pou konprann lè w ap verifye done teknik pipèt yo: Plis volim ki doze a piti, se plis devyasyon yo ka wo. Lefèt ke tout preparasyon yo soti nan menm veso a gen yon efè pozitif sou omojènite (si yo byen melanje). Sa amelyore tou reproduktibilite eksperyans yo.
Lè w ap prepare melanj prensipal la, ou ta dwe ajoute omwen 10% volim anplis (pa egzanp, si ou bezwen 10 preparasyon, kalkile sou baz 11), pou menm dènye veso a ranpli byen. Nan fason sa a, yo ka konpanse (ti) enpresizyon nan pipetaj, ak efè pèt echantiyon lè w ap doze solisyon ki gen detèjan. Detèjan yo genyen nan solisyon anzim tankou polimeraz ak melanj prensipal, sa ki lakòz fòmasyon kim ak rezidi sou sifas enteryè veso nòmal yo.pwent pipèt.
Selon aplikasyon an ak kalite likid ki pral distribye a, yo ta dwe chwazi teknik pipètaj ki kòrèk la (1) epi chwazi ekipman ki apwopriye a. Pou solisyon ki gen detèjan, yo rekòmande yon sistèm deplasman dirèk oswa pwent pipèt yo rele "retansyon ki ba" kòm yon altènativ pou pipèt kousen lè. EfèPwent pipèt ACELi baze sou yon sifas patikilyèman idrofob. Likid ki gen detèjan pa kite yon fim rezidi ni anndan ni deyò, sa ki ka minimize pèt solisyon an.
Anplis dòz egzak tout konpozan yo, li enpòtan tou pou pa gen okenn kontaminasyon nan preparasyon yo. Li pa sifi pou itilize konsomab ki gen gwo pite, paske pwosesis pipetaj la nan yon pipèt kousen lè ka pwodui ayewosòl ki rete nan pipèt la. ADN ki ka genyen nan ayewosòl la ka transfere soti nan yon echantiyon nan yon lòt nan etap pipetaj ki vin apre a e konsa mennen nan kontaminasyon. Sistèm deplasman dirèk yo mansyone pi wo a ka minimize risk sa a tou. Pou pipèt kousen lè, li lojik pou itilize pwent filtè pou pwoteje kòn pipèt la lè yo kenbe espre, ayewosòl ak byomolekil.
Dat piblikasyon: 6 Desanm 2022