避免使用 PCR 板时出错的 5 个简单技巧

聚合酶链式反应(PCR)是生命科学实验室中广为使用的方法之一。

PCR 板由一流的塑料制成,可对收集的样品或结果进行出色的处理和分析。

它们具有薄而均匀的壁,可提供精确的热传递。

为了准备实时应用,DNA或RNA的微小片段被隔离并存储在PCR板中。

PCR 板具有很高的热封效率,并且还能限制热量的流动。

然而,尽管 PCR 板有效且可靠,但在处理样本时仍容易出现错误和不准确之处。

因此,如果您有兴趣获得优质PCR 板。最好联系一家可靠的PCR板制造商。这样您就能确保获得最优惠的价格。

以下是一些需要遵循的预防措施,以避免试剂或样品受到污染并防止结果不准确。

对周围环境进行消毒
由于存在杂质,会出现不正确的阳性或阴性结果,让您对结果产生怀疑。

杂质和污染物以各种形式出现,例如不相关的 DNA 或化学添加剂,最终会降低反应的效率和有效性。

有许多方法可以大大降低 PCR 板的污染率。

使用无菌过滤吸头是防止杂质通过移液器进入样品的另一种有效方法。

配备一套完全洁净的设备,包括移液器和支架,专门用于PCR实验。这将确保实验室内杂质或污染物的转移几乎为零。

使用漂白剂、乙醇擦拭移液器、架子和工作台上的污染物。

为所有 PCR 反应分配预留空间,以进一步减少颗粒污染。

每一步都使用干净的手套并经常更换。

PCR板
检查模板的浓度和纯度。
PCR分析样品时,应保持工作台和设备的清洁。在分析和处理之前,必须验证样品的纯度。

一般来说,分析仪会考虑 DNA 样本的浓度和纯度水平。

尽量使260nm/280nm的吸光度比值不小于1.8。随后使用230nm至320nm之间的波长来识别杂质。

例如,在230nm吸光度下检测离液盐和其他有机化合物。同时,在320nm吸光度下检测并验证DNA样品中的浊度。

避免 PCR 板上产品过载
尽管希望同时运行多个产品,但这会导致 PCR 板的交叉污染。

PCR 板上装载过多的不同产品会造成浪费,并使样本的确定变得极其困难。

保留等分 PCR 试剂的记录
连续的冻融循环和频繁使用等分试样可能会通过重结晶损坏 PCR 试剂、酶和 DNTP。

在准备待分析的样品时,始终尽力监测所用等分试样的速率。

优选的 LIMS 更适合控制库存以及冷冻或解冻的试剂和样品的数量。

选择最佳退火温度。
选择和使用错误的退火温度是导致 PCR 结果出错的另一种原因。

有时,反应不会按计划进行。为了促进反应成功,需要降低退火温度。

然而,降低温度会增加假阳性和引物二聚体出现的机会。

使用 PCR 板时确认熔解曲线分析非常重要,因为它是选择正确退火温度的良好指标。

引物设计软件辅助设计,提供正确的退火温度,直接减少 PCR 板中的错误。

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发布时间:2021年10月30日