यशस्वी प्रवर्धन अभिक्रियांसाठी, प्रत्येक तयारीमध्ये वैयक्तिक अभिक्रिया घटक योग्य एकाग्रतेमध्ये असणे आवश्यक आहे. याव्यतिरिक्त, कोणतेही दूषित पदार्थ होऊ नयेत हे महत्वाचे आहे.
विशेषतः जेव्हा अनेक अभिक्रिया सेट-अप कराव्या लागतात, तेव्हा प्रत्येक अभिकर्मकांना प्रत्येक पात्रात स्वतंत्रपणे पाईप टाकण्याऐवजी तथाकथित मास्टर मिक्स तयार करण्याची स्थापना करण्यात आली आहे. पूर्व-कॉन्फिगर केलेले मिश्रण व्यावसायिकरित्या उपलब्ध आहेत, ज्यामध्ये फक्त नमुना-विशिष्ट घटक (प्राइमर) आणि पाणी जोडले जातात. पर्यायीरित्या, मास्टर मिक्स स्वतः तयार करता येते. दोन्ही प्रकारांमध्ये, मिश्रण प्रत्येक पीसीआर पात्रात टेम्पलेटशिवाय वितरित केले जाते आणि शेवटी वैयक्तिक डीएनए नमुना स्वतंत्रपणे जोडला जातो.
मास्टर मिक्स वापरण्याचे अनेक फायदे आहेत: पहिले, सिंगल पाईपेटिंग स्टेप्सची संख्या कमी होते. अशा प्रकारे, पाईपेटिंग दरम्यान वापरकर्त्याच्या चुकांचा धोका आणि दूषित होण्याचा धोका दोन्ही कमी होतात आणि अर्थातच, वेळ वाचतो. तत्वतः, पाईपेटिंगची अचूकता देखील जास्त असते, कारण मोठ्या प्रमाणात डोस दिले जातात. पाईपेट्सचा तांत्रिक डेटा तपासताना हे समजणे सोपे आहे: डोस केलेले व्हॉल्यूम जितके लहान असेल तितके विचलन जास्त असू शकते. सर्व तयारी एकाच भांड्यातून येतात या वस्तुस्थितीचा एकसंधतेवर सकारात्मक परिणाम होतो (जर चांगले मिसळले असेल तर). हे प्रयोगांची पुनरुत्पादनक्षमता देखील सुधारते.
मास्टर मिक्स तयार करताना, कमीत कमी १०% अतिरिक्त व्हॉल्यूम जोडला पाहिजे (उदा. जर १० तयारी आवश्यक असतील तर ११ च्या आधारावर गणना करा), जेणेकरून शेवटचे भांडे देखील योग्यरित्या भरले जाईल. अशा प्रकारे, (थोड्याशा) पाईपेटिंग चुका आणि डिटर्जंट-युक्त द्रावणांचे डोसिंग करताना नमुना गमावल्याचा परिणाम भरून काढता येतो. डिटर्जंट पॉलिमरेसेस आणि मास्टर मिक्स सारख्या एंजाइम द्रावणांमध्ये असतात, ज्यामुळे फोम तयार होतो आणि सामान्य पृष्ठभागावर अवशेष तयार होतात.पिपेट टिप्स.
वापरण्याच्या पद्धती आणि वितरित करायच्या द्रवाच्या प्रकारानुसार, योग्य पाईपेटिंग तंत्र (1) निवडले पाहिजे आणि योग्य उपकरणे निवडली पाहिजेत. डिटर्जंट असलेल्या द्रावणांसाठी, एअर-कुशन पाईपेट्ससाठी पर्याय म्हणून डायरेक्ट डिस्प्लेसमेंट सिस्टम किंवा तथाकथित "लो रिटेंशन" पाईपेट्सची शिफारस केली जाते.एसीई पिपेट टीपहे विशेषतः हायड्रोफोबिक पृष्ठभागावर आधारित आहे. डिटर्जंट असलेले द्रव आत आणि बाहेर अवशेषांचा थर सोडत नाहीत, जेणेकरून द्रावणाचे नुकसान कमी करता येईल.
सर्व घटकांच्या अचूक डोसिंग व्यतिरिक्त, तयारींमध्ये कोणतेही दूषितीकरण होऊ नये हे देखील महत्वाचे आहे. उच्च शुद्धतेच्या उपभोग्य वस्तू वापरणे पुरेसे नाही, कारण एअर कुशन पिपेटमध्ये पाईपेटिंग प्रक्रियेमुळे पिपेटमध्ये राहणारे एरोसोल तयार होऊ शकतात. एरोसोलमध्ये असलेले डीएनए पुढील पिपेटिंग चरणात एका नमुन्यातून दुसऱ्या नमुन्यात हस्तांतरित केले जाऊ शकते आणि त्यामुळे दूषित होण्यास कारणीभूत ठरू शकते. वर नमूद केलेल्या थेट विस्थापन प्रणाली देखील हा धोका कमी करू शकतात. एअर-कुशन पिपेटसाठी स्प्लॅश, एरोसोल आणि बायोमॉलिक्यूल्स टिकवून ठेवून पिपेट शंकूचे संरक्षण करण्यासाठी फिल्टर टिप्स वापरणे अर्थपूर्ण आहे.
पोस्ट वेळ: डिसेंबर-०६-२०२२