പിസിആർ മിശ്രിതങ്ങൾ പൈപ്പ് ചെയ്യുമ്പോൾ എന്തൊക്കെ ശ്രദ്ധിക്കണം?

വിജയകരമായ ആംപ്ലിഫിക്കേഷൻ പ്രതിപ്രവർത്തനങ്ങൾക്ക്, ഓരോ തയ്യാറെടുപ്പിലും വ്യക്തിഗത പ്രതിപ്രവർത്തന ഘടകങ്ങൾ ശരിയായ സാന്ദ്രതയിൽ ഉണ്ടായിരിക്കേണ്ടത് ആവശ്യമാണ്. കൂടാതെ, മലിനീകരണം ഉണ്ടാകാതിരിക്കേണ്ടത് പ്രധാനമാണ്.

പ്രത്യേകിച്ചും നിരവധി പ്രതിപ്രവർത്തനങ്ങൾ സജ്ജീകരിക്കേണ്ടിവരുമ്പോൾ, ഓരോ റിയാജന്റും ഓരോ പാത്രത്തിലേക്കും വെവ്വേറെ പൈപ്പ് ചെയ്യുന്നതിനുപകരം ഒരു മാസ്റ്റർ മിക്സ് തയ്യാറാക്കാൻ ഇത് സ്ഥാപിച്ചിട്ടുണ്ട്. പ്രീ-കോൺഫിഗർ ചെയ്ത മിശ്രിതങ്ങൾ വാണിജ്യപരമായി ലഭ്യമാണ്, അതിൽ സാമ്പിൾ-നിർദ്ദിഷ്ട ഘടകങ്ങളും (പ്രൈമർ) വെള്ളവും മാത്രമേ ചേർക്കുന്നുള്ളൂ. പകരമായി, മാസ്റ്റർ മിശ്രിതം സ്വയം തയ്യാറാക്കാം. രണ്ട് വകഭേദങ്ങളിലും, ഒരു ടെംപ്ലേറ്റ് ഇല്ലാതെ മിശ്രിതം ഓരോ പിസിആർ പാത്രത്തിലേക്കും വിതരണം ചെയ്യുകയും അവസാനം വ്യക്തിഗത ഡിഎൻഎ സാമ്പിൾ വെവ്വേറെ ചേർക്കുകയും ചെയ്യുന്നു.

ഒരു മാസ്റ്റർ മിക്സ് ഉപയോഗിക്കുന്നതിന് നിരവധി ഗുണങ്ങളുണ്ട്: ഒന്നാമതായി, സിംഗിൾ പൈപ്പറ്റിംഗ് ഘട്ടങ്ങളുടെ എണ്ണം കുറയുന്നു. ഈ രീതിയിൽ, പൈപ്പറ്റിംഗ് സമയത്ത് ഉപയോക്തൃ പിശകുകളുടെ അപകടസാധ്യതയും മലിനീകരണ സാധ്യതയും കുറയ്ക്കുകയും തീർച്ചയായും സമയം ലാഭിക്കുകയും ചെയ്യുന്നു. തത്വത്തിൽ, വലിയ അളവുകളിൽ ഡോസ് ചെയ്യുന്നതിനാൽ പൈപ്പറ്റിംഗ് കൃത്യതയും കൂടുതലാണ്. പൈപ്പറ്റുകളുടെ സാങ്കേതിക ഡാറ്റ പരിശോധിക്കുമ്പോൾ ഇത് മനസ്സിലാക്കാൻ എളുപ്പമാണ്: ഡോസ് ചെയ്ത അളവ് ചെറുതാകുമ്പോൾ, വ്യതിയാനങ്ങൾ കൂടുതലായിരിക്കും. എല്ലാ തയ്യാറെടുപ്പുകളും ഒരേ പാത്രത്തിൽ നിന്നാണ് വരുന്നതെന്ന വസ്തുത ഏകതാനതയിൽ (നന്നായി കലർന്നതാണെങ്കിൽ) നല്ല സ്വാധീനം ചെലുത്തുന്നു. ഇത് പരീക്ഷണങ്ങളുടെ പുനരുൽപാദനക്ഷമതയും മെച്ചപ്പെടുത്തുന്നു.

മാസ്റ്റർ മിക്സ് തയ്യാറാക്കുമ്പോൾ, കുറഞ്ഞത് 10% അധിക വോളിയം ചേർക്കണം (ഉദാ: 10 തയ്യാറെടുപ്പുകൾ ആവശ്യമാണെങ്കിൽ, 11 ന്റെ അടിസ്ഥാനത്തിൽ കണക്കാക്കുക), അങ്ങനെ അവസാന പാത്രം പോലും ശരിയായി നിറയും. ഈ രീതിയിൽ, (ചെറിയ) പൈപ്പറ്റിംഗ് കൃത്യതയില്ലായ്മകളും, ഡിറ്റർജന്റ് അടങ്ങിയ ലായനികൾ ഡോസ് ചെയ്യുമ്പോൾ സാമ്പിൾ നഷ്ടത്തിന്റെ ഫലവും നികത്താനാകും. പോളിമറേസുകൾ, മാസ്റ്റർ മിക്സുകൾ തുടങ്ങിയ എൻസൈം ലായനികളിൽ ഡിറ്റർജന്റുകൾ അടങ്ങിയിരിക്കുന്നു, ഇത് സാധാരണ ലായനികളുടെ ആന്തരിക ഉപരിതലത്തിൽ നുര രൂപപ്പെടലിനും അവശിഷ്ടങ്ങൾക്കും കാരണമാകുന്നു.പൈപ്പറ്റ് ടിപ്പുകൾ.

പ്രയോഗിക്കേണ്ട രീതിയും വിതരണം ചെയ്യേണ്ട ദ്രാവകത്തിന്റെ തരവും അനുസരിച്ച്, ശരിയായ പൈപ്പറ്റിംഗ് സാങ്കേതികത (1) തിരഞ്ഞെടുക്കുകയും ഉചിതമായ ഉപകരണങ്ങൾ തിരഞ്ഞെടുക്കുകയും വേണം. ഡിറ്റർജന്റുകൾ അടങ്ങിയ ലായനികൾക്ക്, ഒരു ഡയറക്ട് ഡിസ്‌പ്ലേസ്‌മെന്റ് സിസ്റ്റം അല്ലെങ്കിൽ എയർ-കുഷൻ പൈപ്പറ്റുകൾക്ക് പകരമായി "ലോ റിട്ടൻഷൻ" പൈപ്പറ്റ് ടിപ്പുകൾ എന്ന് വിളിക്കപ്പെടുന്നു. ഇതിന്റെ പ്രഭാവംഎയ്‌സ് പൈപ്പറ്റ് ടിപ്പ്പ്രത്യേകിച്ച് ഒരു ഹൈഡ്രോഫോബിക് പ്രതലത്തെ അടിസ്ഥാനമാക്കിയുള്ളതാണ്. ഡിറ്റർജന്റുകൾ അടങ്ങിയ ദ്രാവകങ്ങൾ അകത്തും പുറത്തും ഒരു അവശിഷ്ട ഫിലിം അവശേഷിപ്പിക്കുന്നില്ല, അതിനാൽ ലായനിയുടെ നഷ്ടം കുറയ്ക്കാൻ കഴിയും.

എല്ലാ ഘടകങ്ങളുടെയും കൃത്യമായ അളവ് കൂടാതെ, തയ്യാറെടുപ്പുകളിൽ മലിനീകരണം ഉണ്ടാകാതിരിക്കേണ്ടത് പ്രധാനമാണ്. ഉയർന്ന ശുദ്ധതയുള്ള ഉപഭോഗവസ്തുക്കൾ ഉപയോഗിക്കുന്നത് പര്യാപ്തമല്ല, കാരണം ഒരു എയർ കുഷ്യൻ പൈപ്പറ്റിലെ പൈപ്പറ്റ് പ്രക്രിയ പൈപ്പറ്റിൽ അവശേഷിക്കുന്ന എയറോസോളുകൾ ഉത്പാദിപ്പിക്കും. എയറോസോളിൽ അടങ്ങിയിരിക്കാവുന്ന ഡിഎൻഎ, തുടർന്നുള്ള പൈപ്പറ്റ് ഘട്ടത്തിൽ ഒരു സാമ്പിളിൽ നിന്ന് അടുത്തതിലേക്ക് മാറ്റാൻ കഴിയും, അങ്ങനെ മലിനീകരണത്തിലേക്ക് നയിക്കും. മുകളിൽ സൂചിപ്പിച്ച നേരിട്ടുള്ള സ്ഥാനചലന സംവിധാനങ്ങളും ഈ അപകടസാധ്യത കുറച്ചേക്കാം. എയർ-കുഷ്യൻ പൈപ്പറ്റുകൾക്ക്, സ്പ്ലാഷുകൾ, എയറോസോളുകൾ, ബയോമോളിക്യൂളുകൾ എന്നിവ നിലനിർത്തിക്കൊണ്ട് പൈപ്പറ്റ് കോണിനെ സംരക്ഷിക്കുന്നതിന് ഫിൽട്ടർ ടിപ്പുകൾ ഉപയോഗിക്കുന്നത് അർത്ഥവത്താണ്.