PCRプレート使用時のエラーを防ぐ5つの簡単なヒント

ポリメラーゼ連鎖反応 (PCR) は、生命科学の研究室で広く使用されている方法の 1 つです。

PCR プレートは、サンプルや収集された結果の優れた処理と分析のために最高級のプラスチックから製造されています。

薄く均質な壁を備え、正確な熱伝達を実現します。

リアルタイムアプリケーションに備えて、DNA または RNA の微小なセクションが隔離され、PCR プレートに保存されます。

PCR プレートは熱シール効率が高く、熱の流れも制限します。

しかし、PCR プレートは効果的で信頼性が高いものの、サンプルの処理中にエラーや不正確さが簡単に発生してしまいます。

したがって、良質で高品質なものを手に入れたいならPCRプレート。信頼できるPCRプレートメーカーにご連絡いただくのが理想的です。これにより、最良の取引が保証されます。

試薬やサンプルの汚染を防ぎ、結果に不正確さが生じないようにするための注意事項をいくつか示します。

周囲の殺菌
不純物の存在により誤った陽性または陰性が発生し、結果に疑問が生じます。

不純物や汚染物質は、無関係な DNA や化学添加物などさまざまな形で発生し、最終的には反応の効率と効果を低下させます。

PCR プレートの汚染率を大幅に低減する方法は数多くあります。

滅菌済みのフィルターチップを使用することは、ピペットを通じてサンプルに不純物が混入するのを防ぐもう 1 つの便利な方法です。

PCR専用のピペットとラックを含む、完全に清潔な器具一式を用意してください。これにより、実験室内への不純物や汚染物質の拡散を最小限に抑えることができます。

ピペット、ラック、ベンチに漂白剤やエタノールを使用して汚染物質を拭き取ります。

粒子汚染をさらに最小限に抑えるために、すべての PCR 反応に予約スペースを割り当てます。

各ステップごとに清潔な手袋を使用し、頻繁に交換してください。

PCRプレート
テンプレートの濃度と純度を検査します。
PCRでサンプルを分析する際には、使用するベンチと機器の清浄度を維持する必要があります。分析および処理の前に、サンプルの純度を検証することが不可欠です。

一般的に、分析装置は DNA サンプルの濃度と純度レベルを考慮します。

260nm/280nmの吸光度比が1.8以上になるように努めてください。その後、230nmから320nmまでの波長は不純物の同定に使用されます。

例えば、カオトロピック塩やその他の有機化合物は230nmの吸光度で検出されます。また、DNAサンプルの濁度も320nmの吸光度で検出・検証されます。

PCRプレートに製品を入れすぎないように注意する
複数の製品を同時に実行することが望まれる一方で、PCR プレートの相互汚染が発生します。

PCR プレートにさまざまな製品を詰め込みすぎると、サンプルの無駄が生じ、サンプルの確認が非常に困難になります。

PCR試薬の分注記録を保管する
継続的な凍結/解凍サイクルやアリコートの頻繁な使用は、再結晶化により PCR 試薬、酵素、DNTP に損傷を与える可能性があります。

分析するサンプルを準備する際は、常に使用するアリコートの割合を監視するように努めてください。

好ましい LIMS は、在庫と、凍結または解凍された試薬およびサンプルの量を管理するのにより適しています。

最適なアニーリング温度を選択してください。
間違ったアニーリング温度を選択して使用することも、PCR 結果にエラーが含まれるもう一つの方法です。

反応が計画通りに進まない場合もあります。反応を成功させるためには、アニーリング温度を下げることが望ましい場合があります。

ただし、温度を下げると、偽陽性やプライマーダイマーの出現の可能性が高まります。

PCR プレートを使用する場合、融解曲線の分析を確認することが重要です。これは、正しいアニーリング温度を選択するための優れた指標となるからです。

プライマー設計ソフトウェアは設計を支援し、適切なアニーリング温度を提供することで PCR プレートのエラーを直接削減します。

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投稿日時: 2021年10月30日