להצלחת תגובות הגברה, יש צורך שכל רכיבי התגובה יהיו נוכחים בריכוז הנכון בכל הכנה. בנוסף, חשוב שלא יתרחש זיהום.
במיוחד כאשר יש צורך להגדיר תגובות רבות, נקבע כי יש להכין תערובת אב, במקום להכניס כל ריאגנט בנפרד לכל כלי. קיימות תערובות מוגדרות מראש, בהן מוסיפים רק רכיבים ספציפיים לדגימה (פריימר) ומים. לחלופין, ניתן להכין את תערובת האב באופן עצמאי. בשתי הגרסאות, התערובת מחולקת לכל כלי PCR ללא תבנית ודגימת ה-DNA האישית מוסיפה בנפרד בסוף.
לשימוש בתערובת אב יש מספר יתרונות: ראשית, מספר שלבי הפיפטה הבודדים מצטמצם. בדרך זו, ממוזערים הן הסיכון לטעויות משתמש במהלך הפיפטה והן הסיכון לזיהום, וכמובן, נחסך זמן. באופן עקרוני, גם דיוק הפיפטה גבוה יותר, מכיוון שמנתחים כמויות גדולות יותר. קל להבין זאת בעת בדיקת הנתונים הטכניים של פיפטות: ככל שנפח המנה קטן יותר, כך הסטיות יכולות להיות גבוהות יותר. העובדה שכל ההכנות מגיעות מאותו כלי משפיעה לטובה על ההומוגניות (אם מעורבבים היטב). זה גם משפר את יכולת השחזור של הניסויים.
בעת הכנת תערובת האב, יש להוסיף לפחות 10% נפח נוסף (לדוגמה, אם נדרשות 10 הכנות, יש לחשב על סמך 11), כך שגם המיכל האחרון יתמלא כראוי. בדרך זו, ניתן לפצות על אי דיוקים (קלים) בפיפטה, ועל השפעת אובדן הדגימה בעת מינון תמיסות המכילות דטרגנטים. דטרגנטים כלולים בתמיסות אנזימים כגון פולימראזות ותערובות אב, וגורמים להיווצרות קצף ושאריות על המשטח הפנימי של נוזלים רגילים.טיפים לפיפטה.
בהתאם ליישום ולסוג הנוזל המיועד, יש לבחור את טכניקת הפיפטה הנכונה (1) ואת הציוד המתאים. עבור תמיסות המכילות דטרגנטים, מומלצת מערכת הזחה ישירה או קצוות פיפטה המכונים "שימור נמוך" כחלופה לפיפטות כרית אוויר. ההשפעה שלקצה פיפטה של ACEמבוסס על משטח הידרופובי במיוחד. נוזלים המכילים דטרגנטים אינם משאירים שכבת שאריות מבפנים ומבחוץ, כך שניתן למזער את אובדן התמיסה.
מלבד המינון המדויק של כל הרכיבים, חשוב גם שלא יתרחש זיהום של התכשירים. לא מספיק להשתמש בחומרים מתכלים בעלי טוהר גבוה, מכיוון שתהליך הפיטוט בפיפטה עם כרית אוויר יכול לייצר אירוסולים שנשארים בפיפטה. ה-DNA שעשוי להימצא באירוסול יכול לעבור מדגימה אחת לאחרת בשלב הפיטוט הבא וכך להוביל לזיהום. מערכות ההדחה הישירה שהוזכרו לעיל עשויות גם הן למזער סיכון זה. עבור פיפטות עם כרית אוויר, הגיוני להשתמש בקצוות מסנן כדי להגן על חרוט הפיפטה על ידי עצירת התזות, אירוסולים וביומולקולות.
זמן פרסום: 06-12-2022