A sikeres amplifikációs reakciókhoz szükséges, hogy az egyes reakciókomponensek a megfelelő koncentrációban legyenek jelen minden egyes készítményben. Ezenkívül fontos, hogy ne történjen szennyeződés.
Különösen akkor, ha sok reakciót kell beállítani, bevett gyakorlat az úgynevezett master mix elkészítése ahelyett, hogy minden reagenst külön pipettáznánk az egyes edényekbe. Kereskedelmi forgalomban előre konfigurált keverékek kaphatók, amelyekben csak a minta-specifikus komponenseket (primer) és vizet adjuk hozzá. Alternatív megoldásként a master mix elkészíthető önállóan is. Mindkét változatban a keveréket templát nélkül osztják szét az egyes PCR edényekbe, és az egyes DNS-mintákat külön adják hozzá a végén.
A mastermix használatának számos előnye van: Először is, csökken az egyes pipettázási lépések száma. Ily módon minimalizálható mind a pipettázás során a felhasználói hibák, mind a szennyeződés kockázata, és természetesen idő is takarítható meg. Elvileg a pipettázási pontosság is nagyobb, mivel nagyobb térfogatokat adagolunk. Ez könnyen érthető a pipetták műszaki adatainak ellenőrzésekor: Minél kisebb az adagolt térfogat, annál nagyobbak lehetnek az eltérések. Az a tény, hogy minden készítmény ugyanabból az edényből származik, pozitív hatással van a homogenitásra (ha jól összekeverik). Ez javítja a kísérletek reprodukálhatóságát is.
A mastermix elkészítésekor legalább 10% többlettérfogatot kell hozzáadni (pl. ha 10 készítményre van szükség, akkor a 11-es alapján kell számolni), hogy még az utolsó edény is megfelelően megteljen. Így kompenzálhatók a (kisebb) pipettázási pontatlanságok és a mintaveszteség hatása a detergenstartalmú oldatok adagolásakor. A detergensek az enzimoldatokban, például a polimerázokban és a mastermixekben találhatók, ami habképződést és maradványokat okoz a normál belső felületen.pipettahegyek.
Az alkalmazástól és az adagolandó folyadék típusától függően ki kell választani a helyes pipettázási technikát (1) és a megfelelő berendezést. Detergenseket tartalmazó oldatokhoz közvetlen kiszorításos rendszer vagy az úgynevezett „alacsony retenciójú” pipettahegyek ajánlottak a légpárnás pipetták alternatívájaként. A ... hatásaACE PIPETTA hegyKülönösen hidrofób felületen alapul. A mosószereket tartalmazó folyadékok nem hagynak maguk után maradványfilmet sem belül, sem kívül, így az oldatveszteség minimalizálható.
Az összes komponens pontos adagolása mellett az is fontos, hogy a készítmények ne szennyeződjenek be. Nem elegendő nagy tisztaságú fogyóeszközöket használni, mivel a légpárnás pipettákban történő pipettázás során aeroszolok keletkezhetnek, amelyek a pipetta belsejében maradhatnak. Az aeroszolban található DNS a következő pipettázási lépésben átkerülhet az egyik mintáról a másikra, és így szennyeződéshez vezethet. A fent említett közvetlen kiszorításos rendszerek szintén minimalizálhatják ezt a kockázatot. Légpárnás pipetták esetén célszerű szűrőhegyeket használni a pipetta kúpjának védelmére a fröccsenések, aeroszolok és biomolekulák visszatartásával.
Közzététel ideje: 2022. dec. 06.