सफल प्रवर्धन अभिक्रियाओं के लिए यह आवश्यक है कि प्रत्येक तैयारी में अलग-अलग अभिक्रिया घटक सही सांद्रता में मौजूद हों। इसके अलावा, यह भी महत्वपूर्ण है कि कोई संदूषण न हो।
खास तौर पर जब कई अभिक्रियाओं को सेट-अप करना होता है, तो प्रत्येक अभिकर्मक को प्रत्येक बर्तन में अलग-अलग पिपेट करने के बजाय तथाकथित मास्टर मिक्स तैयार करना स्थापित किया गया है। प्री-कॉन्फ़िगर किए गए मिक्स व्यावसायिक रूप से उपलब्ध हैं, जिसमें केवल सैंपल-विशिष्ट घटक (प्राइमर) और पानी मिलाया जाता है। वैकल्पिक रूप से, मास्टर मिक्स को आप खुद भी तैयार कर सकते हैं। दोनों प्रकारों में, मिश्रण को बिना किसी टेम्पलेट के प्रत्येक पीसीआर बर्तन में वितरित किया जाता है और अंत में अलग-अलग डीएनए सैंपल को अलग से जोड़ा जाता है।
मास्टर मिक्स का उपयोग करने के कई फायदे हैं: सबसे पहले, एकल पाइपिंग चरणों की संख्या कम हो जाती है। इस तरह, पाइपिंग के दौरान उपयोगकर्ता की गलतियों का जोखिम और संदूषण का जोखिम दोनों कम हो जाते हैं और निश्चित रूप से, समय की बचत होती है। सिद्धांत रूप में, पाइपिंग की सटीकता भी अधिक होती है, क्योंकि बड़ी मात्रा में खुराक दी जाती है। पिपेट के तकनीकी डेटा की जाँच करते समय यह समझना आसान है: खुराक की मात्रा जितनी छोटी होगी, विचलन उतना ही अधिक हो सकता है। तथ्य यह है कि सभी तैयारियाँ एक ही बर्तन से आती हैं, जिसका समरूपता पर सकारात्मक प्रभाव पड़ता है (यदि अच्छी तरह से मिलाया जाता है)। इससे प्रयोगों की पुनरुत्पादकता में भी सुधार होता है।
मास्टर मिक्स तैयार करते समय, कम से कम 10% अतिरिक्त मात्रा मिलानी चाहिए (जैसे कि यदि 10 तैयारियों की आवश्यकता है, तो 11 के आधार पर गणना करें), ताकि अंतिम बर्तन भी ठीक से भर जाए। इस तरह, (मामूली) पाइपिंग अशुद्धियाँ, और डिटर्जेंट युक्त घोल की खुराक देते समय नमूना हानि के प्रभाव की भरपाई की जा सकती है। डिटर्जेंट एंजाइम समाधानों जैसे कि पॉलीमरेज़ और मास्टर मिक्स में निहित होते हैं, जिससे सामान्य की आंतरिक सतह पर झाग बनता है और अवशेष बनते हैंपिपेट टिप्स.
आवेदन और वितरित किए जाने वाले तरल के प्रकार के आधार पर, सही पाइपिंग तकनीक (1) का चयन किया जाना चाहिए और उपयुक्त उपकरण का चयन किया जाना चाहिए। डिटर्जेंट युक्त समाधानों के लिए, एयर-कुशन पिपेट के विकल्प के रूप में प्रत्यक्ष विस्थापन प्रणाली या तथाकथित "कम प्रतिधारण" पिपेट टिप्स की सिफारिश की जाती है।ऐस पिपेट टिपयह विशेष रूप से हाइड्रोफोबिक सतह पर आधारित है। डिटर्जेंट युक्त तरल पदार्थ अंदर और बाहर कोई अवशेष फिल्म नहीं छोड़ते हैं, ताकि घोल का नुकसान कम से कम हो सके।
सभी घटकों की सटीक खुराक के अलावा, यह भी महत्वपूर्ण है कि तैयारी में कोई संदूषण न हो। उच्च शुद्धता वाले उपभोग्य सामग्रियों का उपयोग करना पर्याप्त नहीं है, क्योंकि एयर कुशन पिपेट में पाइपिंग प्रक्रिया से एरोसोल उत्पन्न हो सकते हैं जो पिपेट में बने रहते हैं। एरोसोल में निहित डीएनए को अगले पाइपिंग चरण में एक नमूने से दूसरे में स्थानांतरित किया जा सकता है और इस प्रकार संदूषण हो सकता है। ऊपर वर्णित प्रत्यक्ष विस्थापन प्रणाली भी इस जोखिम को कम कर सकती है। एयर-कुशन पिपेट के लिए छींटे, एरोसोल और बायोमोलेक्यूल्स को बनाए रखते हुए पिपेट कोन की सुरक्षा के लिए फ़िल्टर टिप्स का उपयोग करना समझदारी है।
पोस्ट करने का समय: दिसम्बर-06-2022