Gus am bi ath-bhualaidhean iomadachaidh soirbheachail, tha e riatanach gum bi na co-phàirtean ath-bhualaidh fa leth an làthair anns an dùmhlachd cheart anns gach ullachadh. A bharrachd air sin, tha e cudromach nach tachair truailleadh sam bith.
Gu h-àraidh nuair a dh’fheumar mòran ath-bheachdan a stèidheachadh, chaidh a stèidheachadh gus measgachadh maighstir ullachadh an àite a bhith a’ pìobaireachd gach ath-bhualadair air leth a-steach do gach soitheach. Tha measgachaidhean ro-shuidhichte rim faighinn gu malairteach, anns nach eil ach co-phàirtean sònraichte don sampall (primer) agus uisge air an cur ris. Air neo, faodar am measgachadh maighstir ullachadh leat fhèin. Anns an dà sheòrsa, tha am measgachadh air a sgaoileadh gu gach soitheach PCR gun teamplaid agus tha an sampall DNA fa leth air a chur ris air leth aig a’ cheann thall.
Tha grunn bhuannachdan ann a bhith a’ cleachdadh measgachadh maighstir: An toiseach, tha an àireamh de cheumannan pipetteachaidh singilte air a lughdachadh. San dòigh seo, tha an cunnart bho mhearachdan cleachdaiche rè pipetteadh agus an cunnart bho thruailleadh air an lughdachadh agus, gu dearbh, tha ùine air a shàbhaladh. Ann am prionnsapal, tha cruinneas pipetteadh nas àirde cuideachd, leis gu bheil meudan nas motha air an dòsadh. Tha seo furasta a thuigsinn nuair a thathar a’ sgrùdadh dàta teicnigeach pipettes: Mar as lugha an tomhas-lìonaidh dòsaichte, ’s ann as àirde as urrainn na diallaidhean a bhith. Tha buaidh mhath aig an fhìrinn gu bheil a h-uile ullachadh a’ tighinn bhon aon shoitheach air aon-ghnèitheachd (ma tha e air a mheasgachadh gu math). Tha seo cuideachd a’ leasachadh ath-riochdachadh nan deuchainnean.
Nuair a bhios am measgachadh maighstir ga ullachadh, bu chòir co-dhiù 10% a bharrachd den mheud a chur ris (me ma tha feum air 10 ullachaidhean, obraich a-mach air bunait 11), gus am bi an soitheach mu dheireadh air a lìonadh gu ceart. San dòigh seo, faodar dìoladh a dhèanamh airson (beag) mhearachdan pipette, agus buaidh call sampall nuair a thathar a’ dòsadh fhuasglaidhean anns a bheil inneal-glanaidh. Tha innealan-glanaidh anns na fuasglaidhean enzyme leithid polymerases agus measgachaidhean maighstir, ag adhbhrachadh cruthachadh cobhar agus fuigheall air uachdar a-staigh an stuth àbhaisteach.molaidhean pipette.
A rèir an tagraidh agus an seòrsa leaghan a thèid a sgaoileadh, bu chòir an dòigh-obrach cheart airson pìobaireachd (1) agus an uidheamachd iomchaidh a thaghadh. Airson fuasglaidhean anns a bheil innealan-glanaidh, thathar a’ moladh siostam gluasaid dhìreach no na cinn-phìoba ris an canar “gleidheadh ìosal” mar roghainn eile an àite pìoban le cluasag adhair. BuaidhBarr Pìoba ACEstèidhichte air uachdar gu sònraichte hydrophobic. Chan fhàg lionntan anns a bheil innealan-glanaidh film fuigheall air an taobh a-staigh agus air an taobh a-muigh, agus mar sin faodar call fuasglaidh a lughdachadh.
A bharrachd air an dòsadh ceart de na pàirtean uile, tha e cudromach cuideachd nach bi na h-ullachaidhean air an truailleadh. Chan eil e gu leòr stuthan consumichte de ghlanachd àrd a chleachdadh, oir faodaidh am pròiseas pipettering ann am pìobaid cluasag adhair aerosolan a thoirt gu buil a dh’fhanas sa phìobaid. Faodar an DNA a dh’ fhaodadh a bhith san aerosol a ghluasad bho aon shampall chun an ath shampall anns a’ cheum pipettering a leanas agus mar sin leantainn gu truailleadh. Faodaidh na siostaman gluasaid dìreach a chaidh ainmeachadh gu h-àrd an cunnart seo a lughdachadh cuideachd. Airson pìoban cluasag adhair, tha e ciallach bàrr sìoltachain a chleachdadh gus còn a’ phìobaid a dhìon le bhith a’ cumail frasadh, aerosolan, agus bith-mholacileulan.
Àm puist: Dùbhlachd-06-2022