Foar suksesfolle amplifikaasjereaksjes is it needsaaklik dat de yndividuele reaksjekomponinten yn elke tarieding yn 'e juste konsintraasje oanwêzich binne. Derneist is it wichtich dat der gjin fersmoarging optreedt.
Benammen as in protte reaksjes opset wurde moatte, is it fêststeld om in saneamde mastermix ta te rieden ynstee fan elk reagens apart yn elk fet te pipetten. Foarôf konfigurearre mixen binne kommersjeel beskikber, wêrby't allinich stekproefspesifike komponinten (primer) en wetter tafoege wurde. As alternatyf kin de mastermix sels taret wurde. Yn beide farianten wurdt it mingsel sûnder sjabloan nei elk PCR-fet ferspraat en wurdt it yndividuele DNA-monster oan 'e ein apart tafoege.
It brûken fan in mastermix hat ferskate foardielen: Earst wurdt it oantal ienmalige pipettearstappen fermindere. Op dizze manier wurdt sawol it risiko op brûkersflaters by it pipettearjen as it risiko op fersmoarging minimalisearre en wurdt fansels tiid besparre. Yn prinsipe is de pipettearkrektens ek heger, om't gruttere folumes dosearre wurde. Dit is maklik te begripen by it kontrolearjen fan de technyske gegevens fan pipetten: Hoe lytser it dosearre folume, hoe heger de ôfwikingen kinne wêze. It feit dat alle tariedingen út itselde fet komme, hat in posityf effekt op homogeniteit (as goed mingd). Dit ferbetteret ek de reprodusearberens fan 'e eksperiminten.
By it tarieden fan 'e mastermix moat teminsten 10% ekstra folume tafoege wurde (bygelyks as 10 tariedings nedich binne, berekkenje dan op basis fan 11), sadat sels it lêste fet goed fol is. Op dizze manier kinne (lytse) pipetteringsûnkrektens en it effekt fan stekproefferlies by it dosearjen fan oplossingen mei detergent kompensearre wurde. Detergenten binne befette yn enzymoplossingen lykas polymerasen en mastermixen, wêrtroch't skomfoarming en resten op it binnenste oerflak fan normale ... ûntsteane.pipettepunten.
Ofhinklik fan 'e tapassing en it type floeistof dat ôfjûn wurde moat, moat de juste pipetteartechnyk (1) keazen wurde en de passende apparatuer. Foar oplossingen dy't detergenten befetsje, wurde in direkt ferpleatsingssysteem of de saneamde "lege retinsje" pipettepunten as alternatyf foar loftkessenpipetten oanrikkemandearre. It effekt fanACE PIPETTE-tipis basearre op in bysûnder hydrofoob oerflak. Floeistoffen dy't detergenten befetsje litte gjin residufilm efter oan 'e binnen- en bûtenkant, sadat it ferlies fan oplossing minimalisearre wurde kin.
Neist de krekte dosearring fan alle komponinten is it ek wichtich dat der gjin fersmoarging fan 'e tariedingen optreedt. It is net genôch om konsumpsjemateriaal fan hege suverens te brûken, om't it pipettearproses yn in loftkessenpipet aerosolen kin produsearje dy't yn 'e pipette bliuwe. It DNA dat yn 'e aerosol kin sitte, kin yn 'e folgjende pipettearstap fan it iene stekproef nei it oare oerdroegen wurde en sa liede ta fersmoarging. De hjirboppe neamde direkte ferpleatsingssystemen kinne dit risiko ek minimalisearje. Foar loftkessenpipetten is it sinfol om filtertips te brûken om de pipettekegel te beskermjen troch spatten, aerosolen en biomolekulen tsjin te hâlden.
Pleatsingstiid: 6 desimber 2022