۵ نکته ساده برای جلوگیری از خطا هنگام کار با پلیت‌های PCR

واکنش‌های زنجیره‌ای پلیمراز (PCR) یکی از روش‌های شناخته‌شده‌ای است که در آزمایشگاه‌های علوم زیستی مورد استفاده قرار می‌گیرد.

صفحات PCR از پلاستیک‌های درجه یک برای پردازش و تجزیه و تحلیل عالی نمونه‌ها یا نتایج جمع‌آوری‌شده تولید می‌شوند.

آنها دیواره‌های نازک و همگنی دارند تا انتقال حرارتی دقیقی را فراهم کنند.

برای آماده‌سازی جهت کاربردهای بلادرنگ، بخش‌های بسیار کوچک DNA یا RNA جدا شده و در صفحات PCR ذخیره می‌شوند.

صفحات PCR در آب‌بندی حرارتی بسیار کارآمد هستند و جریان گرما را نیز محدود می‌کنند.

با این حال، هر چقدر هم که صفحات PCR مؤثر و قابل اعتماد باشند، خطا و بی‌دقتی به راحتی هنگام پردازش نمونه‌ها رخ می‌دهد.

بنابراین اگر به دنبال خریدی با کیفیت و قیمت مناسب هستید،صفحات PCR.ایده آل این است که با یک تولیدکننده معتبر پلیت PCR تماس بگیرید. با این کار، مطمئن خواهید بود که بهترین معامله را انجام می‌دهید.

در اینجا برخی اقدامات احتیاطی برای جلوگیری از آلودگی معرف‌ها یا نمونه‌ها و جلوگیری از ایجاد خطا در نتایج ارائه شده است.

استریل کردن محیط اطراف
مثبت یا منفی های نادرست به دلیل وجود ناخالصی ها رخ می دهد که باعث می شود در نتایج شک کنید.

ناخالصی‌ها و آلاینده‌ها به اشکال مختلفی مانند DNA نامربوط یا افزودنی‌های شیمیایی وجود دارند که در نهایت باعث کاهش کارایی و اثربخشی واکنش می‌شوند.

روش‌های بی‌شماری برای کاهش چشمگیر میزان آلودگی پلیت PCR وجود دارد.

استفاده از سر صافی‌های استریل‌شده، روش مفید دیگری برای جلوگیری از ورود ناخالصی‌ها به نمونه‌های شما از طریق پیپت‌ها است.

یک مجموعه کاملاً تمیز از تجهیزات، شامل پیپت‌ها و قفسه‌ها، را منحصراً برای استفاده از PCR اختصاص دهید. این کار انتقال ناچیز ناخالصی‌ها یا آلودگی‌ها را در اطراف آزمایشگاه تضمین می‌کند.

برای پاک کردن آلودگی‌ها، از سفیدکننده‌ها و اتانول روی پیپت‌ها، قفسه‌ها و میزها استفاده کنید.

برای به حداقل رساندن آلودگی ذرات، یک فضای رزرو شده برای تمام واکنش‌های PCR خود اختصاص دهید.

در هر مرحله از دستکش‌های تمیز استفاده کنید و مرتباً آنها را تعویض کنید.

پلیت‌های PCR
غلظت و خلوص الگو را بررسی کنید.
تمیزی میز و تجهیزات مورد استفاده هنگام تجزیه و تحلیل نمونه‌ها با PCR باید حفظ شود. اعتبارسنجی درجه خلوص نمونه‌ها قبل از تجزیه و تحلیل و پردازش ضروری است.

به طور کلی، آنالیزورها غلظت و میزان خلوص نمونه‌های DNA را در نظر می‌گیرند.

سعی کنید نسبت جذب برای ۲۶۰ نانومتر/۲۸۰ نانومتر کمتر از ۱.۸ نباشد. در حالی که طول موج‌های بعدی بین ۲۳۰ نانومتر و ۳۲۰ نانومتر برای شناسایی ناخالصی‌ها استفاده می‌شوند.

به عنوان مثال، نمک‌های کائوتروپیک و سایر ترکیبات آلی با نرخ جذب ۲۳۰ نانومتر شناسایی می‌شوند. در حالی که کدورت در نمونه‌های DNA نیز با نرخ جذب ۳۲۰ نانومتر شناسایی و تأیید می‌شود.

از پر کردن بیش از حد پلیت‌های PCR با محصول خودداری کنید.
هر چقدر هم که مطلوب باشد که چندین محصول به طور همزمان آزمایش شوند، این امر منجر به آلودگی متقاطع صفحات PCR می‌شود.

پر کردن بیش از حد پلیت‌های PCR با محصولات مختلف، باعث اتلاف وقت شده و تشخیص نمونه‌ها را بسیار دشوار می‌کند.

سوابق معرف‌های PCR آلیکوت را نگه دارید
چرخه‌های مداوم انجماد/ذوب و استفاده مکرر از نمونه‌های آلیکوت ممکن است از طریق تبلور مجدد به معرف‌های PCR، آنزیم‌ها و DNTPها آسیب برساند.

همیشه سعی کنید هنگام آماده‌سازی نمونه‌های مورد تجزیه و تحلیل، میزان استفاده از هر بخش را زیر نظر داشته باشید.

سیستم مدیریت محتوای LIMS ترجیحی برای کنترل موجودی و میزان معرف‌ها و نمونه‌های منجمد یا ذوب‌شده مناسب‌تر است.

بهترین دمای آنیل را انتخاب کنید.
انتخاب و استفاده از دمای اتصال نادرست، روش دیگری است که نتایج PCR را با خطا مواجه می‌کند.

گاهی اوقات، واکنش طبق برنامه پیش نمی‌رود. برای تسهیل واکنش موفقیت‌آمیز، مطلوب است که دمای آنیل کاهش یابد.

با این حال، کاهش دما احتمال نتایج مثبت کاذب و ظهور دایمرهای پرایمر را افزایش می‌دهد.

تأیید آنالیز منحنی ذوب هنگام استفاده از صفحات PCR بسیار مهم است زیرا شاخص خوبی برای انتخاب دمای اتصال صحیح است.

نرم‌افزار طراحی پرایمر به طراحی کمک می‌کند، دمای اتصال مناسب را فراهم می‌کند و مستقیماً خطا را در صفحات PCR کاهش می‌دهد.

به یک پلیت PCR با کیفیت بالا نیاز دارید؟
اگر به این فکر کرده‌اید که از کجا می‌توانید یک تولیدکننده‌ی قابل اعتماد پیدا کنید،پلیت‌های PCRدیگر جستجو نکنید، چون به جای درستی آمده‌اید.

با مهربانیبرای تماس با ما اینجا کلیک کنیدبرای محصولات و خدمات با کیفیت بالا و قیمتی که جیبتان را خالی نکند.