Las reacciones en cadena de la polimerasa (PCR) son uno de los métodos más conocidos y utilizados en los laboratorios de ciencias de la vida.
Las placas PCR se fabrican con plásticos de primera calidad para un excelente procesamiento y análisis de las muestras o resultados recopilados.
Tienen paredes delgadas y homogéneas para proporcionar una transferencia térmica precisa.
Como preparación para aplicaciones en tiempo real, se aíslan pequeñas secciones de ADN o ARN y se almacenan en placas de PCR.
Las placas PCR son altamente eficientes en el sellado térmico y también restringen el flujo de calor.
Sin embargo, por más eficaces y fiables que sean las placas de PCR, es fácil que se produzcan errores e imprecisiones durante el procesamiento de las muestras.
Por lo tanto, si usted está interesado en obtener un producto bueno y de alta calidad,Placas de PCR.Lo ideal es contactar con un fabricante confiable de placas PCR. Así se asegura de obtener la mejor oferta.
A continuación se presentan algunas precauciones a seguir para evitar contaminaciones de reactivos o muestras y evitar que aparezcan imprecisiones en los resultados.
Esterilizando el entorno
Los resultados positivos o negativos incorrectos se producen debido a la presencia de impurezas, lo que hace dudar de los resultados.
Las impurezas y los contaminantes se presentan en diversas formas, como ADN no relacionado o aditivos químicos, que eventualmente disminuyen la eficiencia y eficacia de la reacción.
Existen numerosas formas de reducir en gran medida la tasa de contaminación de la placa PCR.
El uso de puntas de filtro esterilizadas es otra forma útil de evitar que las impurezas se introduzcan en las muestras a través de las pipetas.
Destinar un equipo completamente limpio, compuesto por pipetas y gradillas, exclusivamente para el uso de PCR. Esto garantizará una transferencia mínima de impurezas o contaminantes en el laboratorio.
Utilice blanqueadores y etanol en las pipetas, rejillas y bancos para limpiar los contaminantes.
Asigne un espacio reservado para todas sus reacciones de PCR para minimizar aún más la contaminación de partículas.
Utilice guantes limpios en cada paso y reemplácelos con frecuencia.
Placas de PCR
Inspeccione la concentración y pureza de la plantilla.
Se debe mantener la limpieza de la mesa de trabajo y del equipo utilizado durante el análisis de muestras mediante PCR. Es fundamental validar el grado de pureza de las muestras antes del análisis y procesamiento.
Generalmente, los analizadores tienen en cuenta la concentración y el nivel de pureza de las muestras de ADN.
Asegúrese de que la relación de absorbancia entre 260 nm y 280 nm no sea inferior a 1,8. Las longitudes de onda posteriores, entre 230 nm y 320 nm, se utilizan para identificar impurezas.
En un caso, se detectan sales caotrópicas y otros compuestos orgánicos a una absorbancia de 230 nm. La turbidez en muestras de ADN también se detecta y verifica a una absorbancia de 320 nm.
Evite sobrecargar las placas PCR con producto
Por mucho que se desee ejecutar varios productos simultáneamente, se produce contaminación cruzada de las placas de PCR.
Sobrecargar las placas de PCR con diferentes productos genera desperdicio y dificulta enormemente la determinación de las muestras.
Mantener registros de los reactivos de PCR en alícuotas
Los ciclos continuos de congelación/descongelación y el uso frecuente de alícuotas pueden dañar los reactivos de PCR, las enzimas y los DNTP mediante recristalización.
Intente siempre controlar la tasa de alícuota utilizada mientras prepara las muestras para analizar.
El LIMS preferible es más adecuado para controlar el inventario y la cantidad de reactivos y muestras congeladas o descongeladas.
Elija la mejor temperatura de recocido.
Seleccionar y utilizar una temperatura de hibridación incorrecta es otro método por el cual los resultados de PCR contienen errores.
A veces, la reacción no se desarrolla según lo previsto. Es conveniente reducir la temperatura de recocido para facilitar una reacción exitosa.
Sin embargo, al reducir la temperatura aumentan las posibilidades de que se produzcan falsos positivos y de que aparezcan dímeros de cebadores.
Es importante confirmar el análisis de la curva de fusión al utilizar las placas de PCR, ya que es un buen indicador para seleccionar la temperatura de recocido correcta.
El software de diseño de cebadores ayuda con el diseño y proporciona la temperatura de recocido correcta, lo que reduce directamente los errores en las placas de PCR.
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Hora de publicación: 30 de octubre de 2021