5 einfache Tipps zur Fehlervermeidung bei der Arbeit mit PCR-Platten

Polymerase-Kettenreaktionen (PCR) sind eine der bekanntesten Methoden, die in biowissenschaftlichen Laboren eingesetzt werden.

Die PCR-Platten werden aus erstklassigen Kunststoffen hergestellt, um eine hervorragende Verarbeitung und Analyse der Proben oder gesammelten Ergebnisse zu ermöglichen.

Sie haben dünne und homogene Wände, um eine präzise Wärmeübertragung zu gewährleisten.

Zur Vorbereitung für Echtzeitanwendungen werden winzige Abschnitte von DNA oder RNA isoliert und in PCR-Platten gelagert.

Die PCR-Platten sind hocheffizient beim Heißversiegeln und schränken zudem den Wärmefluss ein.

Doch so effektiv und zuverlässig PCR-Platten auch sind, bei der Probenverarbeitung schleichen sich leicht Fehler und Ungenauigkeiten ein.

Wenn Sie also an einer guten und hochwertigenPCR-Platten.Am besten wenden Sie sich an einen zuverlässigen PCR-Plattenhersteller. So erhalten Sie garantiert das beste Angebot.

Um eine Kontamination der Reagenzien oder Proben zu vermeiden und zu verhindern, dass sich Ungenauigkeiten in die Ergebnisse einschleichen, sollten Sie die folgenden Vorsichtsmaßnahmen beachten.

Sterilisieren der Umgebung
Falsch positive oder negative Ergebnisse entstehen durch das Vorhandensein von Verunreinigungen, was Zweifel an den Ergebnissen aufkommen lässt.

Verunreinigungen und Schadstoffe treten in verschiedenen Formen auf, beispielsweise als nicht verwandte DNA oder als chemische Zusätze, die letztendlich die Effizienz und Wirksamkeit der Reaktion verringern.

Es gibt zahlreiche Möglichkeiten, die Kontaminationsrate der PCR-Platte stark zu reduzieren.

Die Verwendung sterilisierter Filterspitzen ist eine weitere nützliche Methode, um zu verhindern, dass Verunreinigungen über die Pipetten in Ihre Proben gelangen.

Verwenden Sie ausschließlich sauberes Equipment, bestehend aus Pipetten und Racks, für die PCR. Dadurch wird die Übertragung von Verunreinigungen und Kontaminanten im Labor minimiert.

Verwenden Sie Bleichmittel und Ethanol auf den Pipetten, Gestellen und Bänken, um Verunreinigungen abzuwischen.

Weisen Sie allen Ihren PCR-Reaktionen einen reservierten Platz zu, um die Partikelkontamination weiter zu minimieren.

Verwenden Sie bei jedem Schritt saubere Handschuhe und wechseln Sie diese häufig.

PCR-Platten
Überprüfen Sie die Konzentration und Reinheit der Vorlage.
Bei der PCR-Analyse von Proben muss die Sauberkeit der Labortische und Geräte gewährleistet sein. Der Reinheitsgrad der Proben muss vor der Analyse und Verarbeitung überprüft werden.

Im Allgemeinen berücksichtigen Analysatoren die Konzentration und den Reinheitsgrad der DNA-Proben.

Das Absorptionsverhältnis bei 260 nm/280 nm darf nicht unter 1,8 liegen. Wellenlängen zwischen 230 nm und 320 nm werden zur Identifizierung von Verunreinigungen verwendet.

Beispielsweise werden chaotrope Salze und andere organische Verbindungen bei einer Absorptionsrate von 230 nm erkannt. Trübungen in DNA-Proben werden ebenfalls bei einer Absorptionsrate von 320 nm erkannt und verifiziert.

Vermeiden Sie eine Überladung der PCR-Platten mit Produkt
Auch wenn die gleichzeitige Ausführung mehrerer Produkte erwünscht ist, kommt es zu einer Kreuzkontamination der PCR-Platten.

Das Überladen der PCR-Platten mit unterschiedlichen Produkten führt zu Verschwendung und erschwert die Probenbestimmung erheblich.

Führen Sie Aufzeichnungen über Aliquot-PCR-Reagenzien
Kontinuierliche Gefrier-/Auftauzyklen und die häufige Verwendung von Aliquots können die PCR-Reagenzien, Enzyme und DNTPs durch Rekristallisation beschädigen.

Achten Sie bei der Vorbereitung der zu analysierenden Proben stets darauf, die verwendete Aliquotrate zu überwachen.

Zur Kontrolle des Bestands und der Menge der eingefrorenen oder aufgetauten Reagenzien und Proben ist vorzugsweise ein LIMS geeignet.

Wählen Sie die beste Glühtemperatur.
Eine weitere Möglichkeit, dass PCR-Ergebnisse fehlerhaft sind, besteht darin, die falsche Annealing-Temperatur auszuwählen und zu verwenden.

Manchmal verläuft die Reaktion nicht wie geplant. Um eine erfolgreiche Reaktion zu ermöglichen, ist es wünschenswert, die Annealing-Temperatur zu senken.

Allerdings erhöht sich durch die Senkung der Temperatur die Wahrscheinlichkeit falsch positiver Ergebnisse und der Entstehung von Primerdimeren.

Bei der Verwendung von PCR-Platten ist es wichtig, die Analyse der Schmelzkurve zu bestätigen, da sie ein guter Indikator für die Auswahl der richtigen Annealing-Temperatur ist.

Primer-Design-Software hilft beim Design und sorgt für die richtige Annealing-Temperatur, wodurch Fehler in den PCR-Platten direkt reduziert werden.

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Veröffentlichungszeit: 30. Oktober 2021