Для паспяховых рэакцый ампліфікацыі неабходна, каб асобныя кампаненты рэакцыі прысутнічалі ў правільнай канцэнтрацыі ў кожным прэпараце. Акрамя таго, важна не дапусціць забруджвання.
Асабліва калі трэба правесці шмат рэакцый, было ўстаноўлена, што замест таго, каб піпетаваць кожны рэагент асобна ў кожную пасудзіну, рыхтуецца так званая галоўная сумесь. У продажы ёсць загадзя сфакусаваныя сумесі, у якія дадаюцца толькі спецыфічныя для ўзору кампаненты (праймер) і вада. Акрамя таго, галоўную сумесь можна прыгатаваць самастойна. У абодвух варыянтах сумесь размяркоўваецца па кожнай пасудзіне для ПЦР без шаблону, а індывідуальны ўзор ДНК дадаецца асобна ў канцы.
Выкарыстанне галоўнай сумесі мае некалькі пераваг: па-першае, памяншаецца колькасць этапаў піпетавання. Такім чынам, мінімізуецца як рызыка памылак карыстальніка падчас піпетавання, так і рызыка забруджвання, і, вядома ж, эканоміцца час. У прынцыпе, дакладнасць піпетавання таксама вышэйшая, бо дазуюцца большыя аб'ёмы. Гэта лёгка зразумець пры праверцы тэхнічных дадзеных піпетак: чым меншы дазаваны аб'ём, тым большымі могуць быць адхіленні. Той факт, што ўсе прэпараты паступаюць з адной ёмістасці, станоўча ўплывае на аднастайнасць (пры добрым змешванні). Гэта таксама паляпшае ўзнаўляльнасць эксперыментаў.
Пры падрыхтоўцы галоўнай сумесі варта дадаць не менш за 10% аб'ёму (напрыклад, калі патрабуецца 10 прэпаратаў, разлічваць зыходзячы з 11), каб нават апошняя ёмістасць напоўнілася належным чынам. Такім чынам можна кампенсаваць (нязначныя) недакладнасці піпетавання і ўплыў страты ўзору пры дазаванні раствораў, якія змяшчаюць мыйныя сродкі. Мыйныя сродкі ўтрымліваюцца ў ферментных растворах, такіх як палімеразы і галоўная сумесь, што выклікае ўтварэнне пены і рэшткаў на ўнутранай паверхні нармальных...наканечнікі піпетак.
У залежнасці ад прымянення і тыпу вадкасці, якая павінна дазавацца, варта выбраць правільную тэхніку піпетавання (1) і выбраць адпаведнае абсталяванне. Для раствораў, якія змяшчаюць мыйныя сродкі, рэкамендуецца сістэма прамога выцяснення або так званыя наканечнікі для піпетак з «нізкім утрыманнем» у якасці альтэрнатывы піпеткам на паветранай падушцы. ЭфектНаканечнік піпеткі ACEзаснаваны на асабліва гідрафобнай паверхні. Вадкасці, якія змяшчаюць мыйныя сродкі, не пакідаюць плёнкі знутры і звонку, таму страты раствора можна мінімізаваць.
Акрамя дакладнага дазавання ўсіх кампанентаў, важна таксама сачыць за тым, каб прэпараты не забруджваліся. Недастаткова выкарыстоўваць расходныя матэрыялы высокай чысціні, бо працэс піпетавання ў піпетцы з паветранай падушкай можа прывесці да ўтварэння аэразоляў, якія застаюцца ў піпетцы. ДНК, якая можа ўтрымлівацца ў аэразолі, можа быць перададзена з аднаго ўзору ў наступны на наступным этапе піпетавання і, такім чынам, прывесці да забруджвання. Вышэйзгаданыя сістэмы прамога выцяснення таксама могуць мінімізаваць гэтую рызыку. Для піпетак з паветранай падушкай мае сэнс выкарыстоўваць фільтруючыя наканечнікі для абароны конуса піпеткі, утрымліваючы пырскі, аэразолі і біямалекулы.
Час публікацыі: 06 снежня 2022 г.