移取 PCR 混合物时应考虑什么？

为了确保扩增反应成功，每次制备过程中各反应组分的浓度必须正确。此外，避免污染也至关重要。

尤其是在需要设置多个反应时，通常会采用制备所谓的预混液 (Master Mix) 的方法，而不是将每种试剂分别移入每个反应容器中。市售的预混液中仅添加针对特定样本的组分（引物）和水。您也可以自行制备预混液。两种方法均将预混液分配到每个 PCR 反应容器中，无需模板，最后再单独添加单个 DNA 样本。

使用预混液有几个优点：首先，减少了单次移液步骤的数量。这样，既可以最大限度地降低移液过程中用户失误的风险，又可以最大限度地降低污染风险，当然，还可以节省时间。原则上，由于移液量更大，移液精度也更高。这在检查移液器的技术参数时很容易理解：移液量越小，偏差就越大。所有制剂均来自同一容器，这对于均匀性（如果混合均匀）有积极的影响。这也提高了实验的可重复性。

制备预混液时，应至少额外添加 10% 的体积（例如，如果需要制备 10 份，则以 11 份计算），以便即使最后一个容器也能正确填充。这样可以补偿（轻微的）移液不准确以及在加入含洗涤剂的溶液时样品损失的影响。酶溶液（例如聚合酶）和预混液中含有洗涤剂，会导致泡沫形成并在正常容器内表面残留。移液器吸头.

根据应用和待移液液体的类型，应选择正确的移液技术 (1) 和合适的设备。对于含有洗涤剂的溶液，建议使用直接置换系统或所谓的“低吸附”移液器吸头来替代气垫式移液器。ACE 移液器吸头基于高度疏水的表面。含有清洁剂的液体不会在内外部留下残留膜，从而最大限度地减少溶液的损失。

除了所有成分的精确计量外，确保制剂不被污染也至关重要。仅仅使用高纯度的耗材是不够的，因为气垫移液器在移液过程中会产生残留在移液器中的气溶胶。气溶胶中可能含有的DNA可能会在接下来的移液步骤中从一个样本转移到下一个样本，从而导致污染。上述直接置换系统也可以最大限度地降低这种风险。对于气垫移液器，使用过滤吸头来保护移液器锥体是明智之举，因为它可以阻挡飞溅物、气溶胶和生物分子。