เพื่อให้เกิดปฏิกิริยาการขยายที่ประสบความสำเร็จ จำเป็นต้องมีส่วนประกอบของปฏิกิริยาแต่ละส่วนในความเข้มข้นที่ถูกต้องในแต่ละการเตรียม นอกจากนี้ สิ่งสำคัญคือต้องไม่มีการปนเปื้อนเกิดขึ้น
โดยเฉพาะอย่างยิ่งเมื่อต้องเตรียมปฏิกิริยาหลายอย่าง จึงได้มีการจัดทำขึ้นเพื่อเตรียมสิ่งที่เรียกว่าส่วนผสมหลักแทนที่จะใช้ปิเปตรีเอเจนต์แต่ละตัวแยกกันในแต่ละภาชนะ ส่วนผสมที่กำหนดค่าไว้ล่วงหน้ามีจำหน่ายในเชิงพาณิชย์ โดยจะเติมเฉพาะส่วนประกอบเฉพาะตัวอย่าง (ไพรเมอร์) และน้ำเท่านั้น อีกทางเลือกหนึ่งคือ คุณสามารถเตรียมส่วนผสมหลักได้ด้วยตัวเอง ในทั้งสองรูปแบบ ส่วนผสมจะถูกกระจายไปยังภาชนะ PCR แต่ละใบโดยไม่ต้องใช้เทมเพลต และตัวอย่าง DNA แต่ละตัวอย่างจะถูกเติมแยกกันในตอนท้าย
การใช้ส่วนผสมหลักมีข้อดีหลายประการ ประการแรก จำนวนขั้นตอนการปิเปตแบบเดี่ยวลดลง ด้วยวิธีนี้ ความเสี่ยงของข้อผิดพลาดของผู้ใช้ระหว่างการปิเปตและความเสี่ยงของการปนเปื้อนก็ลดลง และแน่นอนว่าประหยัดเวลาด้วย โดยหลักการแล้ว ความแม่นยำในการปิเปตก็สูงขึ้นด้วย เนื่องจากมีการกำหนดปริมาณที่มากขึ้น ซึ่งเข้าใจได้ง่ายเมื่อตรวจสอบข้อมูลทางเทคนิคของปิเปต ยิ่งปริมาณที่กำหนดน้อย ความเบี่ยงเบนก็จะยิ่งมากขึ้น ความจริงที่ว่าการเตรียมทั้งหมดมาจากภาชนะเดียวกันนั้นมีผลดีต่อความสม่ำเสมอ (หากผสมกันได้ดี) นอกจากนี้ยังปรับปรุงการทำซ้ำของการทดลองอีกด้วย
เมื่อเตรียมส่วนผสมหลัก ควรเพิ่มปริมาตรอย่างน้อย 10% (เช่น หากต้องเตรียม 10 ครั้ง ให้คำนวณจาก 11) เพื่อให้แม้แต่ภาชนะสุดท้ายก็เติมได้พอดี ด้วยวิธีนี้ ความไม่แม่นยำในการปิเปต (เล็กน้อย) และผลกระทบของการสูญเสียตัวอย่างเมื่อตวงสารละลายที่มีผงซักฟอก ผงซักฟอกจะอยู่ในสารละลายเอนไซม์ เช่น โพลิเมอเรสและส่วนผสมหลัก ทำให้เกิดฟองและสารตกค้างบนพื้นผิวด้านในของสารละลายปกติปลายปิเปต.
ขึ้นอยู่กับการใช้งานและประเภทของของเหลวที่จะจ่าย ควรเลือกวิธีการปิเปตที่ถูกต้อง (1) และเลือกอุปกรณ์ที่เหมาะสม สำหรับสารละลายที่มีผงซักฟอก แนะนำให้ใช้ระบบการแทนที่โดยตรงหรือที่เรียกว่าปลายปิเปตแบบ "กักเก็บต่ำ" เป็นทางเลือกแทนปิเปตแบบมีเบาะลม ผลของปลายปิเปตเอซมีลักษณะเป็นพื้นผิวที่ไม่ชอบน้ำเป็นพิเศษ ของเหลวที่ประกอบด้วยผงซักฟอกจะไม่ทิ้งคราบตกค้างทั้งภายในและภายนอก จึงลดการสูญเสียสารละลายได้
นอกจากการกำหนดปริมาณส่วนผสมทั้งหมดให้ถูกต้องแล้ว ยังมีความสำคัญอีกด้วยที่จะต้องไม่มีการปนเปื้อนของส่วนผสม การใช้สารสิ้นเปลืองที่มีความบริสุทธิ์สูงนั้นไม่เพียงพอ เนื่องจากกระบวนการปิเปตในปิเปตแบบมีเบาะลมอาจผลิตละอองลอยที่ยังคงอยู่ในปิเปตได้ DNA ที่อาจบรรจุอยู่ในละอองลอยสามารถถ่ายโอนจากตัวอย่างหนึ่งไปยังตัวอย่างถัดไปในขั้นตอนการปิเปตครั้งต่อไปได้ จึงทำให้เกิดการปนเปื้อนได้ ระบบการเคลื่อนย้ายโดยตรงที่กล่าวถึงข้างต้นอาจช่วยลดความเสี่ยงนี้ลงได้เช่นกัน สำหรับปิเปตแบบมีเบาะลม การใช้หัวกรองเพื่อปกป้องกรวยปิเปตโดยกักเก็บละอองลอย ละอองลอย และไบโอโมเลกุลจึงมีความสมเหตุสมผล
เวลาโพสต์: 6 ธันวาคม 2565