සාර්ථක විස්තාරණ ප්රතික්රියා සඳහා, එක් එක් සූදානම තුළ තනි ප්රතික්රියා සංරචක නිවැරදි සාන්ද්රණයකින් තිබීම අවශ්ය වේ. ඊට අමතරව, කිසිදු දූෂණයක් සිදු නොවීම වැදගත් වේ.
විශේෂයෙන් බොහෝ ප්රතික්රියා සකස් කිරීමට සිදු වූ විට, එක් එක් ප්රතික්රියාකාරකය එක් එක් භාජනයට වෙන වෙනම නල මාර්ගයෙන් යැවීම වෙනුවට ඊනියා මාස්ටර් මිශ්රණයක් සකස් කිරීම ස්ථාපිත කර ඇත. පූර්ව වින්යාස කරන ලද මිශ්රණ වාණිජමය වශයෙන් ලබා ගත හැකි අතර, එහිදී සාම්පල-විශේෂිත සංරචක (ප්රයිමර්) සහ ජලය පමණක් එකතු කරනු ලැබේ. විකල්පයක් ලෙස, මාස්ටර් මිශ්රණය ඔබ විසින්ම සකස් කළ හැකිය. ප්රභේද දෙකෙහිම, මිශ්රණය සැකිල්ලක් නොමැතිව එක් එක් PCR භාජනයට බෙදා හරින අතර අවසානයේ තනි DNA සාම්පලය වෙන වෙනම එකතු කරනු ලැබේ.
ප්රධාන මිශ්රණයක් භාවිතා කිරීමෙන් වාසි කිහිපයක් ඇත: පළමුව, තනි පයිප්ප සවි කිරීමේ පියවර ගණන අඩු වේ. මේ ආකාරයෙන්, පයිප්ප සවි කිරීමේදී පරිශීලක දෝෂ ඇතිවීමේ අවදානම සහ දූෂණය වීමේ අවදානම යන දෙකම අවම වන අතර, ඇත්ත වශයෙන්ම, කාලය ඉතිරි වේ. ප්රතිපත්තිමය වශයෙන්, විශාල පරිමාවන් මාත්රා කර ඇති බැවින්, පයිප්ප සවි කිරීමේ නිරවද්යතාවය ද වැඩි වේ. පයිප්පවල තාක්ෂණික දත්ත පරීක්ෂා කිරීමේදී මෙය තේරුම් ගැනීම පහසුය: මාත්රා කළ පරිමාව කුඩා වන තරමට, අපගමනයන් වැඩි විය හැකිය. සියලුම සූදානම එකම භාජනයකින් පැමිණීම සමජාතීයතාවයට ධනාත්මක බලපෑමක් ඇති කරයි (හොඳින් මිශ්ර කර ඇත්නම්). මෙය අත්හදා බැලීම්වල ප්රතිනිෂ්පාදන හැකියාව ද වැඩි දියුණු කරයි.
ප්රධාන මිශ්රණය සකස් කිරීමේදී, අවම වශයෙන් 10% අමතර පරිමාවක් එකතු කළ යුතුය (උදා: සූදානම 10 ක් අවශ්ය නම්, 11 පදනම මත ගණනය කරන්න), එවිට අවසාන භාජනය පවා නිසි ලෙස පුරවනු ලැබේ. මේ ආකාරයෙන්, (සුළු) නල මාර්ගගත කිරීමේ සාවද්යතා සහ ඩිටර්ජන්ට් අඩංගු ද්රාවණ මාත්රා කිරීමේදී සාම්පල නැතිවීමේ බලපෑම වන්දි ලබා ගත හැකිය. ඩිටර්ජන්ට් පොලිමරේස් සහ මාස්ටර් මිශ්රණ වැනි එන්සයිම ද්රාවණවල අඩංගු වන අතර එමඟින් සාමාන්ය ද්රාවණවල අභ්යන්තර මතුපිට පෙන සෑදීම සහ අපද්රව්ය ඇති කරයි.පයිප්ප ඉඟි.
යෙදීම සහ බෙදා හැරිය යුතු ද්රව වර්ගය අනුව, නිවැරදි පයිප්ප ඇලවීමේ තාක්ෂණය (1) තෝරා ගත යුතු අතර සුදුසු උපකරණ තෝරා ගත යුතුය. ඩිටර්ජන්ට් අඩංගු විසඳුම් සඳහා, සෘජු විස්ථාපන පද්ධතියක් හෝ වායු-කුෂන් පයිප්ප සඳහා විකල්පයක් ලෙස ඊනියා "අඩු රඳවා ගැනීමේ" පයිප්ප ඉඟි නිර්දේශ කෙරේ. බලපෑමACE PIPETTE ඉඟියවිශේෂයෙන් ජලභීතික මතුපිටක් මත පදනම් වේ. ඩිටර්ජන්ට් අඩංගු ද්රව ඇතුළත හා පිටත අපද්රව්ය පටලයක් ඉතිරි නොකරයි, එවිට ද්රාවණය නැතිවීම අවම කර ගත හැකිය.
සියලුම සංරචකවල නිශ්චිත මාත්රාවට අමතරව, සූදානම දූෂණය වීම සිදු නොවීම ද වැදගත් වේ. ඉහළ සංශුද්ධතාවයකින් යුත් පරිභෝජන ද්රව්ය භාවිතා කිරීම ප්රමාණවත් නොවේ, මන්ද වායු කුෂන් පයිප්පයක පයිප්ප දැමීමේ ක්රියාවලිය පයිප්පයේ රැඳී ඇති එයරොසෝල් නිපදවිය හැකිය. පහත දැක්වෙන පයිප්ප දැමීමේ පියවරේදී එයරොසෝල් වල අඩංගු විය හැකි DNA එක් සාම්පලයකින් ඊළඟ සාම්පලයට මාරු කළ හැකි අතර එමඟින් දූෂණයට හේතු වේ. ඉහත සඳහන් කළ සෘජු විස්ථාපන පද්ධති ද මෙම අවදානම අවම කළ හැකිය. වායු කුෂන් පයිප්ප සඳහා, ඉසින, එයරොසෝල් සහ ජෛව අණු රඳවා තබා ගැනීමෙන් පයිප්ප කේතුව ආරක්ෂා කිරීම සඳහා පෙරහන් ඉඟි භාවිතා කිරීම අර්ථවත් කරයි.
පළ කිරීමේ කාලය: දෙසැම්බර්-06-2022