Fir erfollegräich Amplifikatiounsreaktiounen ass et néideg, datt déi eenzel Reaktiounskomponenten an der richteger Konzentratioun an all Virbereedung präsent sinn. Zousätzlech ass et wichteg, datt keng Kontaminatioun optrieden.
Besonnesch wann vill Reaktiounen opgeriicht musse ginn, ass et etabléiert ginn, e sougenannte Mastermix virzebereeden, anstatt all Reagens separat an all Behälter ze pipetten. Virkonfiguréiert Mëschunge si kommerziell verfügbar, bei deenen nëmme probespezifesch Komponenten (Primer) a Waasser bäigefüügt ginn. Alternativ kann de Mastermix selwer virbereet ginn. Bei béide Varianten gëtt d'Mëschung ouni Schabloun an all PCR-Behälter verdeelt an déi individuell DNA-Prouf gëtt um Enn separat bäigefüügt.
D'Benotzung vun engem Mastermix huet verschidde Virdeeler: Éischtens gëtt d'Zuel vun den eenzelne Pipettéierungsschrëtt reduzéiert. Op dës Manéier gëtt souwuel de Risiko vu Benotzerfeeler beim Pipettéiere wéi och de Risiko vu Kontaminatioun miniméiert an natierlech gëtt Zäit gespuert. Am Prinzip ass d'Pipettéierungsgenauegkeet och méi héich, well méi grouss Volumen doséiert ginn. Dëst ass einfach ze verstoen wann een d'technesch Donnéeë vu Pipetten iwwerpréift: Wat méi kleng den doséierte Volumen ass, wat méi héich kënnen d'Ofwäichunge sinn. D'Tatsaach, datt all Virbereedungen aus dem selwechte Behälter kommen, huet e positiven Effekt op d'Homogenitéit (wann gutt gemëscht). Dëst verbessert och d'Reproduzéierbarkeet vun den Experimenter.
Bei der Virbereedung vum Mastermix solle mindestens 10 % zousätzlech Volumen derbäigesat ginn (z.B. wann 10 Virbereedunge gebraucht ginn, berechent op Basis vun 11), sou datt och de leschte Behälter richteg gefëllt ass. Op dës Manéier kënnen (liicht) Pipettéierungsonnauegkeeten an den Effekt vum Proufverloscht bei der Doséierung vu Léisunge mat Detergent kompenséiert ginn. Detergenten sinn an Enzymléisungen wéi Polymerasen a Mastermixen enthale, wat zu Schaumbildung a Réckstänn op der bannenzeger Uewerfläch vun normale ... féiert.Pipettspëtzen.
Jee no der Uwendung an der Aart vun der Flëssegkeet, déi soll dispenséiert ginn, soll déi richteg Pipettéierungstechnik (1) an déi entspriechend Ausrüstung gewielt ginn. Fir Léisungen, déi Detergenten enthalen, gëtt e System mat direkter Verdrängung oder déi sougenannt "Low Retention"-Pipettespëtzen als Alternativ zu Loftkëssenpipetten recommandéiert. Den Effekt vunACE PIPETTENSPËTZbaséiert op enger besonnesch hydrophober Uewerfläch. Flëssegkeeten, déi Detergenten enthalen, hannerloossen keen Réckstandsfilm bannen an baussen, sou datt de Verloscht vun der Léisung miniméiert ka ginn.
Nieft der exakter Doséierung vun alle Komponenten ass et och wichteg, datt keng Kontaminatioun vun de Virbereedungen optrieden. Et ass net genuch, Verbrauchsmaterialien mat héijer Rengheet ze benotzen, well de Pipettéierungsprozess an enger Loftkëssenpipette Aerosoler produzéiere kann, déi an der Pipett bleiwen. D'DNA, déi am Aerosol enthale ka sinn, kann am nächste Pipettéierungsschratt vun enger Prouf op déi nächst transferéiert ginn a sou zu enger Kontaminatioun féieren. Déi uewe genannten direkt Verdrängungssystemer kënnen dëse Risiko och miniméieren. Fir Loftkëssenpipetten ass et sënnvoll, Filterspëtzen ze benotzen, fir de Pipettkonus ze schützen, andeems Sprëtzer, Aerosoler a Biomoleküle zréckgehale ginn.
Zäitpunkt vun der Verëffentlechung: 06.12.2022