성공적인 증폭 반응을 위해서는 각 반응 구성 요소가 각 준비 과정에서 정확한 농도로 존재해야 합니다. 또한, 오염이 발생하지 않도록 하는 것이 중요합니다.
특히 여러 반응을 설정해야 하는 경우, 각 시약을 각 용기에 따로 피펫팅하는 대신 소위 마스터 믹스(master mix)를 준비하는 것이 확립되었습니다. 미리 구성된 믹스는 시중에서 판매되며, 샘플에 맞는 성분(프라이머)과 물만 첨가됩니다. 또는 마스터 믹스를 직접 준비할 수도 있습니다. 두 가지 방법 모두, 혼합물을 주형 없이 각 PCR 용기에 분배하고, 마지막에 개별 DNA 샘플을 따로 첨가합니다.
마스터 믹스를 사용하면 여러 가지 장점이 있습니다. 첫째, 단일 피펫팅 단계 수가 줄어듭니다. 이를 통해 피펫팅 중 사용자 오류 위험과 오염 위험이 최소화되고 시간도 절약됩니다. 원칙적으로 더 많은 양을 투여하기 때문에 피펫팅 정확도도 더 높습니다. 이는 피펫의 기술 데이터를 확인하면 쉽게 이해할 수 있습니다. 투여량이 적을수록 편차가 커질 수 있습니다. 모든 시료가 동일한 용기에서 나온다는 사실은 (잘 혼합된 경우) 균질성에 긍정적인 영향을 미칩니다. 또한 실험의 재현성도 향상됩니다.
마스터 믹스를 제조할 때는 최소 10%의 추가 용량을 첨가해야 합니다(예: 10회 제조가 필요한 경우 11회를 기준으로 계산). 이렇게 하면 마지막 용기에도 제대로 채워질 수 있습니다. 이렇게 하면 (약간의) 피펫팅 부정확성과 세제 함유 용액을 주입할 때 발생하는 샘플 손실의 영향을 보상할 수 있습니다. 세제는 중합효소와 같은 효소 용액이나 마스터 믹스에 함유되어 있어 일반 용기의 내부 표면에 거품이 형성되고 잔류물이 남습니다.피펫 팁.
적용 분야와 분주할 액체의 종류에 따라 올바른 피펫팅 기법(1)을 선택하고 적절한 장비를 선택해야 합니다. 세제가 포함된 용액의 경우, 에어쿠션 피펫 대신 직접 치환 방식이나 소위 "저잔류" 피펫 팁을 사용하는 것이 좋습니다.에이스 피펫 팁는 특히 소수성 표면을 기반으로 합니다. 세제가 함유된 액체는 내부와 외부에 잔여물 필름을 남기지 않아 용액 손실을 최소화할 수 있습니다.
모든 성분의 정확한 투여량 외에도, 제제의 오염이 발생하지 않도록 하는 것이 중요합니다. 고순도 소모품을 사용하는 것만으로는 충분하지 않습니다. 에어 쿠션 피펫의 피펫팅 과정에서 피펫 내부에 에어로졸이 남을 수 있기 때문입니다. 에어로졸에 포함된 DNA는 다음 피펫팅 단계에서 한 샘플에서 다음 샘플로 이동하여 오염을 유발할 수 있습니다. 위에서 언급한 직접 치환 시스템 또한 이러한 위험을 최소화할 수 있습니다. 에어 쿠션 피펫의 경우, 필터 팁을 사용하여 피펫 콘에 튀는 액체, 에어로졸, 생체 분자 등을 걸러내 보호하는 것이 좋습니다.
게시 시간: 2022년 12월 6일