წარმატებული ამპლიფიკაციის რეაქციებისთვის აუცილებელია, რომ რეაქციის ცალკეული კომპონენტები თითოეულ პრეპარატში სწორი კონცენტრაციით იყოს წარმოდგენილი. გარდა ამისა, მნიშვნელოვანია, რომ დაბინძურება არ მოხდეს.
განსაკუთრებით მაშინ, როდესაც ბევრი რეაქციის დაგეგმვაა საჭირო, დადგენილია ე.წ. მასტერ-მიქსის მომზადება თითოეული რეაგენტის თითოეულ ჭურჭელში ცალ-ცალკე პიპეტირების ნაცვლად. კომერციულად ხელმისაწვდომია წინასწარ კონფიგურირებული ნარევები, რომლებშიც მხოლოდ ნიმუშისთვის სპეციფიკური კომპონენტები (პრაიმერი) და წყალი ემატება. ალტერნატიულად, მასტერ-მიქსის მომზადება დამოუკიდებლადაც შეგიძლიათ. ორივე ვარიანტში, ნარევი ნაწილდება თითოეულ PCR ჭურჭელში შაბლონის გარეშე და დნმ-ის ინდივიდუალური ნიმუში ბოლოს ცალკე ემატება.
მასტერ მიქსის გამოყენებას რამდენიმე უპირატესობა აქვს: პირველ რიგში, მცირდება პიპეტირების ერთჯერადი ნაბიჯების რაოდენობა. ამ გზით, მინიმუმამდეა დაყვანილი როგორც მომხმარებლის შეცდომების რისკი პიპეტირების დროს, ასევე დაბინძურების რისკი და, რა თქმა უნდა, იზოგება დრო. პრინციპში, პიპეტირების სიზუსტეც უფრო მაღალია, რადგან დოზირება უფრო დიდი მოცულობებით ხდება. ეს ადვილი გასაგებია პიპეტების ტექნიკური მონაცემების შემოწმებისას: რაც უფრო მცირეა დოზირებული მოცულობა, მით უფრო მაღალი შეიძლება იყოს გადახრები. ის ფაქტი, რომ ყველა პრეპარატი ერთი და იგივე ჭურჭლიდან მოდის, დადებითად მოქმედებს ერთგვაროვნებაზე (თუ კარგად არის შერეული). ეს ასევე აუმჯობესებს ექსპერიმენტების რეპროდუცირებადობას.
მთავარი ნარევის მომზადებისას უნდა დაემატოს მინიმუმ 10% დამატებითი მოცულობა (მაგ., თუ საჭიროა 10 მომზადება, გამოთვალეთ 11-ის საფუძველზე), რათა ბოლო ჭურჭელიც კი სათანადოდ შეივსოს. ამ გზით, შესაძლებელია კომპენსირებული იყოს (მცირე) პიპეტირების უზუსტობები და ნიმუშის დაკარგვის ეფექტი სარეცხი საშუალებების შემცველი ხსნარების დოზირებისას. სარეცხი საშუალებები შეიცავს ფერმენტულ ხსნარებს, როგორიცაა პოლიმერაზები და მთავარი ნარევები, რაც იწვევს ქაფის წარმოქმნას და ნარჩენების წარმოქმნას ნორმალური ზედაპირის შიდა ზედაპირზე.პიპეტის წვერები.
გამოყენებისა და გამოსაყენებელი სითხის ტიპის მიხედვით, უნდა შეირჩეს პიპეტირების სწორი ტექნიკა (1) და შესაბამისი აღჭურვილობა. სარეცხი საშუალებების შემცველი ხსნარებისთვის, ჰაერის ბალიშისებრი პიპეტების ალტერნატივად რეკომენდებულია პირდაპირი გადაადგილების სისტემა ან ე.წ. „დაბალი შეკავების“ პიპეტის წვერები.ACE პიპეტის წვერიდამზადებულია განსაკუთრებით ჰიდროფობულ ზედაპირზე. სარეცხი საშუალებების შემცველი სითხეები არ ტოვებს ნარჩენ აპკს შიგნიდან და გარედან, რაც ხსნარის დანაკარგის მინიმუმამდე დაყვანას უწყობს ხელს.
ყველა კომპონენტის ზუსტი დოზირების გარდა, მნიშვნელოვანია, რომ პრეპარატები არ დაბინძურდეს. მაღალი სისუფთავის სახარჯი მასალების გამოყენება საკმარისი არ არის, რადგან ჰაერის ბალიშიან პიპეტში პიპეტირების პროცესს შეუძლია წარმოქმნას აეროზოლები, რომლებიც პიპეტში რჩება. აეროზოლში შესაძლოა შემავალი დნმ-ის პიპეტირება ერთი ნიმუშიდან მეორეზე მომდევნო პიპეტირების ეტაპზე მოხდეს და ამით დაბინძურება გამოიწვიოს. ზემოთ ხსენებული პირდაპირი გადაადგილების სისტემები ასევე ამცირებს ამ რისკს. ჰაერის ბალიშიან პიპეტებში გონივრულია ფილტრის წვერების გამოყენება პიპეტის კონუსის დასაცავად შხეფების, აეროზოლების და ბიომოლეკულების შეკავებით.
გამოქვეყნების დრო: 2022 წლის 6 დეკემბერი