Pambuka
Apa Ekstraksi Asam Nukleat?
Ing istilah sing paling gampang, ekstraksi asam nukleat yaiku mbusak RNA lan/utawa DNA saka sampel lan kabeh keluwihan sing ora perlu.Proses ekstraksi ngisolasi asam nukleat saka sampel lan ngasilake ing bentuk eluat pekat, bebas saka diluent lan rereged sing bisa mengaruhi aplikasi hilir.
Aplikasi Ekstraksi Asam Nukleat
Asam nukleat sing diresiki digunakake ing macem-macem aplikasi sing beda-beda, ing macem-macem industri.Perawatan kesehatan bisa uga dadi wilayah sing paling akeh digunakake, kanthi RNA lan DNA sing diresiki dibutuhake kanggo macem-macem tujuan tes sing beda.
Aplikasi ekstraksi asam nukleat ing perawatan kesehatan kalebu:
- Urutan Generasi Sabanjure (NGS)
- Genotyping SNP adhedhasar amplifikasi
- Genotyping adhedhasar Array
- Watesan Enzim Pencernaan
- Analisis nggunakake Enzim Modifikasi (contone Ligasi lan Kloning)
Ana uga lapangan liyane ngluwihi perawatan kesehatan ing ngendi ekstraksi asam nukleat digunakake, kalebu nanging ora diwatesi kanggo tes paternitas, forensik lan genomik.
Sejarah Singkat Ekstraksi Asam Nukleat
Ekstraksi DNAtanggal bali dawa, karo isolasi pisanan dikenal wis dileksanakake dening dokter Swiss jenenge Friedrich Miescher ing 1869. Miescher ngarep-arep kanggo ngatasi prinsip dhasar urip kanthi nemtokake komposisi kimia saka sel.Sawise gagal karo limfosit, dheweke bisa entuk endapan kasar DNA saka leukosit sing ditemokake ing pus ing bandage sing dibuwang.Dheweke nindakake iki kanthi nambahake asam banjur alkali menyang sel kanggo ninggalake sitoplasma sel, lan banjur ngembangake protokol kanggo misahake DNA saka protein liyane.
Sawise riset terobosan Miescher, akeh ilmuwan liyane sing maju lan ngembangake teknik kanggo ngisolasi lan ngresiki DNA.Edwin Joseph Cohn, ilmuwan protein ngembangake akeh teknik kanggo pemurnian protein nalika Perang Dunia II.Dheweke tanggung jawab kanggo ngisolasi fraksi albumin serum plasma getih, sing penting kanggo njaga tekanan osmotik ing pembuluh getih.Iki penting kanggo njaga para prajurit urip.
Ing taun 1953 Francis Crick, bebarengan karo Rosalind Franklin lan James Watson, nemtokake struktur DNA, nuduhake yen DNA kasebut dumadi saka rong untaian rantai dawa nukleotida asam nukleat.Penemuan terobosan iki mbukak dalan kanggo Meselson lan Stahl, sing bisa ngembangake protokol sentrifugasi gradien kepadatan kanggo ngisolasi DNA saka bakteri E. Coli nalika nduduhake replikasi DNA semi-konservatif sajrone eksperimen taun 1958.
Teknik Ekstraksi Asam Nukleat
Apa 4 tahap ekstraksi DNA?
Kabeh cara extraction godhok mudhun kanggo langkah dhasar padha.
Gangguan sel.Tahap iki, uga dikenal minangka lisis sel, melu ngrusak tembok sel lan/utawa membran sel, supaya bisa ngeculake cairan intraselular sing ngemot asam nukleat sing disenengi.
Ngilangi lebu sing ora dikarepake.Iki kalebu lipid membran, protein lan asam nukleat liyane sing ora dikarepake sing bisa ngganggu aplikasi hilir.
Isolasi.Ana sawetara cara sing beda kanggo ngisolasi asam nukleat saka lysate sing wis diresiki sing digawe, sing ana ing antarane rong kategori utama: adhedhasar solusi utawa negara padhet (ndeleng bagean sabanjure).
Konsentrasi.Sawise asam nukleat wis diisolasi saka kabeh rereged lan pengencer liyane, asam nukleat disajikake ing eluat sing konsentrasi banget.
Rong Jinis Ekstraksi
Ana rong jinis ekstraksi asam nukleat - metode adhedhasar solusi lan metode solid state.Cara adhedhasar solusi uga dikenal minangka metode ekstraksi kimia, amarga nggunakake bahan kimia kanggo ngrusak sel lan ngakses materi nukleat.Iki bisa nggunakake senyawa organik kayata fenol lan kloroform, utawa senyawa anorganik sing kurang mbebayani lan mulane luwih dianjurake kayata Proteinase K utawa gel silika.
Conto cara ekstraksi kimia sing beda kanggo ngrusak sel kalebu:
- Osmotic rupture saka membran
- Pencernaan enzimatik saka tembok sel
- Solubilisation saka membran
- Kanthi deterjen
- Kanthi perawatan alkali
Teknik kahanan padhet, uga dikenal minangka metode mekanik, kalebu eksploitasi cara interaksi DNA karo substrat padhet.Kanthi milih manik utawa molekul sing bakal diikat DNA nanging analit ora bakal, bisa dipisahake loro kasebut.Conto teknik ekstraksi fase padat kalebu nggunakake silika lan manik magnetik.
Ekstraksi Manik Magnetik Dijelasake
Metode Ekstraksi Manik Magnetik
Potensi ekstraksi nggunakake manik magnetik pisanan diakoni ing paten AS sing diajukake dening Trevor Hawkins, kanggo lembaga riset Whitehead Institute.Paten iki ngakoni manawa bisa ngekstrak materi genetik kanthi cara ngiket menyang operator pendukung sing padhet, sing bisa dadi manik magnetik.Prinsip kasebut yaiku sampeyan nggunakake manik magnetik sing fungsional banget sing bakal diikat materi genetik, sing banjur bisa dipisahake saka supernatan kanthi ngetrapake gaya magnet ing njaba wadhah sing nyekel sampel.
Napa Gunakake Ekstraksi Manik Magnetik?
Teknologi ekstraksi manik magnetik dadi saya umum, amarga potensial kanggo prosedur ekstraksi sing cepet lan efisien.Ing jaman saiki ana perkembangan manik-manik magnetik sing fungsional banget kanthi sistem penyangga sing cocog, sing ndadekake otomatisasi ekstraksi asam nukleat lan alur kerja sing entheng sumber daya lan hemat biaya.Kajaba iku, metode ekstraksi manik magnetik ora kalebu langkah sentrifugasi sing bisa nyebabake gaya geser sing ngrusak potongan DNA sing luwih dawa.Iki tegese untaian DNA sing luwih dawa tetep utuh, sing penting ing tes genomik.
Wektu kirim: Nov-25-2022