परिचय
न्यूक्लिक एसिड निकासी के हो?
धेरै सरल शब्दहरूमा, न्यूक्लिक एसिड निकासी भनेको नमूनाबाट आरएनए र/वा डीएनए हटाउनु हो र आवश्यक नपर्ने सबै अतिरिक्तहरू।निकासीको प्रक्रियाले नमूनाबाट न्यूक्लिक एसिडहरूलाई अलग गर्छ र तिनीहरूलाई कुनै पनि डाउनस्ट्रीम अनुप्रयोगहरूलाई असर गर्न सक्ने पातलो र प्रदूषकहरूबाट मुक्त, केन्द्रित एल्युएटको रूपमा उत्पादन गर्दछ।
न्यूक्लिक एसिड निकासी को आवेदन
प्युरिफाइड न्यूक्लिक एसिडहरू धेरै फरक उद्योगहरूमा विभिन्न अनुप्रयोगहरूको प्रशस्ततामा प्रयोग गरिन्छ।स्वास्थ्य सेवा सायद यो क्षेत्र हो जहाँ यो धेरै प्रयोग गरिन्छ, शुद्ध आरएनए र डीएनए विभिन्न परीक्षण उद्देश्यहरूको होस्टको लागि आवश्यक छ।
स्वास्थ्य सेवामा न्यूक्लिक एसिड निकासीका अनुप्रयोगहरू समावेश छन्:
- नेक्स्ट जेनेरेशन सिक्वेन्सिङ (NGS)
- प्रवर्धन आधारित SNP जीनोटाइपिङ
- एरे-आधारित जीनोटाइपिङ
- प्रतिबन्ध इन्जाइम पाचन
- परिमार्जन गर्ने इन्जाइमहरू प्रयोग गरेर विश्लेषण गर्दछ (जस्तै लिगेशन र क्लोनिङ)
त्यहाँ स्वास्थ्य सेवाभन्दा बाहिरका अन्य क्षेत्रहरू पनि छन् जहाँ न्यूक्लिक एसिड निकासी प्रयोग गरिन्छ, जसमा पितृत्व परीक्षण, फोरेंसिक्स र जीनोमिक्समा सीमित छैन।
न्यूक्लिक एसिड निकासीको संक्षिप्त इतिहास
डीएनए निकासी1869 मा फ्रेडरिक मिशेर नामक स्विस चिकित्सकद्वारा पहिलो ज्ञात आइसोलेसन गरिएको थियो। Miescher कोषहरूको रासायनिक संरचना निर्धारण गरेर जीवनको आधारभूत सिद्धान्तहरू समाधान गर्ने आशामा थिए।लिम्फोसाइटहरू असफल भएपछि, उनले खारेज गरिएका ब्यान्डेजहरूमा पसमा पाइने ल्युकोसाइट्सबाट डीएनएको कच्चा अवक्षेपण प्राप्त गर्न सक्षम भए।उनले सेलको साइटोप्लाज्म छोड्न कोशिकामा एसिड र क्षार थपेर यो गरे, र त्यसपछि डीएनएलाई अन्य प्रोटीनहरूबाट अलग गर्न प्रोटोकल विकास गरे।
Miescher को ग्राउन्ड ब्रेकिंग अनुसन्धान पछि, धेरै अन्य वैज्ञानिकहरूले DNA अलग गर्न र शुद्ध गर्ने प्रविधिहरू अगाडि बढाएका छन्।प्रोटिन वैज्ञानिक एडविन जोसेफ कोनले दोस्रो विश्वयुद्धमा प्रोटिन शुद्धीकरणका लागि धेरै प्रविधिहरू विकास गरेका थिए।उहाँ रगतको प्लाज्माको सीरम एल्बुमिन अंशलाई अलग गर्न जिम्मेवार हुनुहुन्थ्यो, जुन रक्त नलीहरूमा ओस्मोटिक दबाब कायम राख्न महत्त्वपूर्ण छ।यो सैनिकहरूलाई जीवित राख्नको लागि महत्त्वपूर्ण थियो।
1953 मा फ्रान्सिस क्रिकले रोजालिन्ड फ्रैंकलिन र जेम्स वाट्सनसँग मिलेर डीएनएको संरचना निर्धारण गरे, यो देखाउँदै कि यो न्यूक्लिक एसिड न्यूक्लियोटाइडको लामो चेनहरूको दुई स्ट्र्यान्डबाट बनेको थियो।यो सफलता खोजले Meselson र Stahl को लागि मार्ग प्रशस्त गर्यो, जो E. Coli ब्याक्टेरियाबाट DNA लाई अलग गर्न घनत्व ग्रेडियन्ट सेन्ट्रीफ्युगेशन प्रोटोकल विकास गर्न सक्षम थिए किनभने तिनीहरूले आफ्नो 1958 प्रयोगको क्रममा DNA को अर्ध-रूढिवादी प्रतिकृति प्रदर्शन गरे।
न्यूक्लिक एसिड निकासी को प्रविधि
DNA निकासीका ४ चरणहरू के हुन्?
सबै निकासी विधिहरू समान आधारभूत चरणहरूमा उबलिन्छन्।
सेल अवरोध।यो चरण, जसलाई सेल लाइसिस पनि भनिन्छ, कोशिकाको पर्खाल र/वा कोशिका झिल्लीलाई भत्काउनु समावेश छ, ताकि रूचिको न्यूक्लिक एसिडहरू समावेश गर्ने अन्तर-सेलुलर तरल पदार्थहरू छोड्नुहोस्।
अनावश्यक मलबे हटाउने।यसमा झिल्ली लिपिड, प्रोटीन र अन्य अनावश्यक न्यूक्लिक एसिडहरू समावेश छन् जसले डाउनस्ट्रीम अनुप्रयोगहरूमा हस्तक्षेप गर्न सक्छ।
आइसोलेसन।तपाईंले सिर्जना गर्नुभएको क्लियर गरिएको लाइसेटबाट रुचिको न्यूक्लिक एसिडहरू अलग गर्ने विभिन्न तरिकाहरू छन्, जुन दुई मुख्य कोटीहरू बीचमा पर्दछ: समाधानमा आधारित वा ठोस अवस्था (अर्को खण्ड हेर्नुहोस्)।
एकाग्रता।न्यूक्लिक एसिडहरू अन्य सबै प्रदूषकहरू र पातहरूबाट अलग गरिसकेपछि, तिनीहरू उच्च-केन्द्रित एल्युएटमा प्रस्तुत हुन्छन्।
निकासी को दुई प्रकार
त्यहाँ दुई प्रकारका न्यूक्लिक एसिड निकासी छन् - समाधान आधारित विधिहरू र ठोस राज्य विधिहरू।समाधानमा आधारित विधिलाई रासायनिक निकासी विधि पनि भनिन्छ, किनकि यसले कोशिकालाई तोड्न र न्यूक्लिक सामग्रीमा पहुँच गर्न रसायनहरूको प्रयोग समावेश गर्दछ।यो या त जैविक यौगिकहरू जस्तै फिनोल र क्लोरोफर्म, वा कम हानिकारक र त्यसैले प्रोटिनेज K वा सिलिका जेल जस्ता अकार्बनिक यौगिकहरू प्रयोग गर्न सकिन्छ।
सेल तोक्न विभिन्न रासायनिक निकासी विधिहरूको उदाहरणहरू समावेश छन्:
- ओस्मोटिक झिल्ली फुट्ने
- कोशिका पर्खाल को इन्जाइम्याटिक पाचन
- झिल्ली को घुलनशीलता
- डिटर्जेंट संग
- क्षार उपचार संग
ठोस अवस्था प्रविधिहरू, जसलाई मेकानिकल विधिहरू पनि भनिन्छ, यसमा DNA कसरी ठोस सब्सट्रेटसँग अन्तरक्रिया गर्छ भन्ने शोषण समावेश गर्दछ।एक मनका वा अणु चयन गरेर जुन DNA मा बाँध्नेछ तर विश्लेषकले गर्दैन, यो दुई अलग गर्न सम्भव छ।सिलिका र चुम्बकीय मोतीहरू प्रयोग गर्ने सहित ठोस-चरण निकासी प्रविधिहरूका उदाहरणहरू।
चुम्बकीय मनका निकासी व्याख्या
चुम्बकीय मनका निकासी विधि
चुम्बकीय मोतीहरू प्रयोग गरेर निकासीको सम्भावना पहिलो पटक ट्रेभर हकिन्सले ह्वाइटहेड इन्स्टिच्युट अनुसन्धान संस्थाको लागि दायर गरेको अमेरिकी पेटेन्टमा पहिचान गरिएको थियो।यो पेटेन्टले स्वीकार गर्यो कि आनुवंशिक सामग्रीलाई ठोस समर्थन वाहकमा बाँध्न सम्भव छ, जुन चुम्बकीय मोती हुन सक्छ।सिद्धान्त यो हो कि तपाईंले उच्च कार्यात्मक चुम्बकीय मोती प्रयोग गर्नुहुन्छ जसमा आनुवंशिक सामग्री बाँधिन्छ, जसलाई नमूना समात्ने भाँडाको बाहिरी भागमा चुम्बकीय बल लागू गरेर सुपरनेटेन्टबाट अलग गर्न सकिन्छ।
किन चुम्बकीय मनका निकासी प्रयोग?
चुम्बकीय मनका निकासी प्रविधि बढ्दो प्रचलित हुँदै गइरहेको छ, सम्भाव्यताका कारण यसले द्रुत र कुशल निकासी प्रक्रियाहरूको लागि राख्छ।हालैका समयमा उपयुक्त बफर प्रणालीहरूको साथ उच्च कार्यात्मक चुम्बकीय मोतीहरूको विकास भएको छ, जसले न्यूक्लिक एसिड निकासीको स्वचालन र कार्यप्रवाहलाई सम्भव बनाएको छ जुन धेरै स्रोत प्रकाश र लागत-कुशल छ।साथै, चुम्बकीय मनका निकासी विधिहरूमा सेन्ट्रीफ्युगेशन चरणहरू समावेश हुँदैन जसले DNA को लामो टुक्राहरू टुक्रा पार्ने शियर बलहरू निम्त्याउन सक्छ।यसको मतलब डीएनएको लामो स्ट्र्यान्डहरू अक्षुण्ण रहन्छ, जुन जीनोमिक्स परीक्षणमा महत्त्वपूर्ण छ।
पोस्ट समय: नोभेम्बर-25-2022