ಪರಿಚಯ
ನ್ಯೂಕ್ಲಿಯಿಕ್ ಆಮ್ಲದ ಹೊರತೆಗೆಯುವಿಕೆ ಎಂದರೇನು?
ಅತ್ಯಂತ ಸರಳವಾದ ಪದಗಳಲ್ಲಿ, ನ್ಯೂಕ್ಲಿಯಿಕ್ ಆಮ್ಲದ ಹೊರತೆಗೆಯುವಿಕೆ ಎಂದರೆ ಮಾದರಿಯಿಂದ ಆರ್‌ಎನ್‌ಎ ಮತ್ತು/ಅಥವಾ ಡಿಎನ್ಎ ತೆಗೆಯುವುದು ಮತ್ತು ಅಗತ್ಯವಿಲ್ಲದ ಎಲ್ಲಾ ಹೆಚ್ಚುವರಿ.ಹೊರತೆಗೆಯುವ ಪ್ರಕ್ರಿಯೆಯು ಮಾದರಿಯಿಂದ ನ್ಯೂಕ್ಲಿಯಿಕ್ ಆಮ್ಲಗಳನ್ನು ಪ್ರತ್ಯೇಕಿಸುತ್ತದೆ ಮತ್ತು ಯಾವುದೇ ಡೌನ್‌ಸ್ಟ್ರೀಮ್ ಅಪ್ಲಿಕೇಶನ್‌ಗಳ ಮೇಲೆ ಪರಿಣಾಮ ಬೀರುವ ದುರ್ಬಲಗೊಳಿಸುವ ಮತ್ತು ಮಾಲಿನ್ಯಕಾರಕಗಳಿಂದ ಮುಕ್ತವಾದ ಸಾಂದ್ರೀಕೃತ ಎಲುಯೇಟ್ ರೂಪದಲ್ಲಿ ಅವುಗಳನ್ನು ನೀಡುತ್ತದೆ.
ನ್ಯೂಕ್ಲಿಯಿಕ್ ಆಮ್ಲದ ಹೊರತೆಗೆಯುವಿಕೆಯ ಅನ್ವಯಗಳು
ಶುದ್ಧೀಕರಿಸಿದ ನ್ಯೂಕ್ಲಿಯಿಕ್ ಆಮ್ಲಗಳನ್ನು ಅನೇಕ ವಿಭಿನ್ನ ಕೈಗಾರಿಕೆಗಳಲ್ಲಿ ವಿವಿಧ ಅನ್ವಯಿಕೆಗಳಲ್ಲಿ ಬಳಸಲಾಗುತ್ತದೆ.ಹೆಲ್ತ್‌ಕೇರ್ ಬಹುಶಃ ಇದನ್ನು ಹೆಚ್ಚಾಗಿ ಬಳಸುವ ಪ್ರದೇಶವಾಗಿದೆ, ವಿವಿಧ ಪರೀಕ್ಷಾ ಉದ್ದೇಶಗಳಿಗಾಗಿ ಶುದ್ಧೀಕರಿಸಿದ ಆರ್‌ಎನ್‌ಎ ಮತ್ತು ಡಿಎನ್ಎ ಅಗತ್ಯವಿದೆ.
ಆರೋಗ್ಯ ರಕ್ಷಣೆಯಲ್ಲಿ ನ್ಯೂಕ್ಲಿಯಿಕ್ ಆಮ್ಲದ ಹೊರತೆಗೆಯುವಿಕೆಯ ಅನ್ವಯಗಳು ಸೇರಿವೆ:
- ಮುಂದಿನ ಪೀಳಿಗೆಯ ಅನುಕ್ರಮ (NGS)
- ವರ್ಧನೆ-ಆಧಾರಿತ SNP ಜೀನೋಟೈಪಿಂಗ್
- ಅರೇ-ಆಧಾರಿತ ಜೀನೋಟೈಪಿಂಗ್
- ನಿರ್ಬಂಧ ಕಿಣ್ವ ಜೀರ್ಣಕ್ರಿಯೆ
- ಮಾರ್ಪಡಿಸುವ ಕಿಣ್ವಗಳನ್ನು ಬಳಸಿಕೊಂಡು ವಿಶ್ಲೇಷಿಸುತ್ತದೆ (ಉದಾಹರಣೆಗೆ ಬಂಧನ ಮತ್ತು ಕ್ಲೋನಿಂಗ್)
ನ್ಯೂಕ್ಲಿಯಿಕ್ ಆಸಿಡ್ ಹೊರತೆಗೆಯುವಿಕೆಯನ್ನು ಬಳಸಲಾಗುವ ಹೆಲ್ತ್‌ಕೇರ್‌ಗೆ ಮೀರಿದ ಇತರ ಕ್ಷೇತ್ರಗಳಿವೆ, ಪಿತೃತ್ವ ಪರೀಕ್ಷೆ, ನ್ಯಾಯಶಾಸ್ತ್ರ ಮತ್ತು ಜೀನೋಮಿಕ್ಸ್ ಸೇರಿದಂತೆ ಆದರೆ ಸೀಮಿತವಾಗಿಲ್ಲ.
ನ್ಯೂಕ್ಲಿಯಿಕ್ ಆಮ್ಲದ ಹೊರತೆಗೆಯುವಿಕೆಯ ಸಂಕ್ಷಿಪ್ತ ಇತಿಹಾಸ
ಡಿಎನ್ಎ ಹೊರತೆಗೆಯುವಿಕೆ1869 ರಲ್ಲಿ ಫ್ರೆಡ್ರಿಕ್ ಮಿಶರ್ ಎಂಬ ಸ್ವಿಸ್ ವೈದ್ಯನಿಂದ ಮೊದಲ ತಿಳಿದಿರುವ ಪ್ರತ್ಯೇಕತೆಯನ್ನು ನಡೆಸಲಾಯಿತು. ಮೈಷರ್ ಜೀವಕೋಶಗಳ ರಾಸಾಯನಿಕ ಸಂಯೋಜನೆಯನ್ನು ನಿರ್ಧರಿಸುವ ಮೂಲಕ ಜೀವನದ ಮೂಲಭೂತ ತತ್ವಗಳನ್ನು ಪರಿಹರಿಸಲು ಆಶಿಸುತ್ತಿದ್ದರು.ಲಿಂಫೋಸೈಟ್ಸ್ನೊಂದಿಗೆ ವಿಫಲವಾದ ನಂತರ, ಅವರು ತಿರಸ್ಕರಿಸಿದ ಬ್ಯಾಂಡೇಜ್ಗಳ ಮೇಲೆ ಕೀವು ಕಂಡುಬರುವ ಲ್ಯುಕೋಸೈಟ್ಗಳಿಂದ DNA ಯ ಕಚ್ಚಾ ಅವಕ್ಷೇಪವನ್ನು ಪಡೆಯಲು ಸಾಧ್ಯವಾಯಿತು.ಜೀವಕೋಶದ ಸೈಟೋಪ್ಲಾಸಂ ಅನ್ನು ಬಿಡಲು ಕೋಶಕ್ಕೆ ಆಮ್ಲ ಮತ್ತು ನಂತರ ಕ್ಷಾರವನ್ನು ಸೇರಿಸುವ ಮೂಲಕ ಅವನು ಇದನ್ನು ಮಾಡಿದನು ಮತ್ತು ನಂತರ ಇತರ ಪ್ರೋಟೀನ್‌ಗಳಿಂದ ಡಿಎನ್‌ಎಯನ್ನು ಪ್ರತ್ಯೇಕಿಸಲು ಪ್ರೋಟೋಕಾಲ್ ಅನ್ನು ಅಭಿವೃದ್ಧಿಪಡಿಸಿದನು.
ಮಿಶರ್ ಅವರ ನೆಲ-ಮುರಿಯುವ ಸಂಶೋಧನೆಯ ನಂತರ, ಅನೇಕ ಇತರ ವಿಜ್ಞಾನಿಗಳು ಡಿಎನ್‌ಎಯನ್ನು ಪ್ರತ್ಯೇಕಿಸಲು ಮತ್ತು ಶುದ್ಧೀಕರಿಸಲು ತಂತ್ರಗಳನ್ನು ಅಭಿವೃದ್ಧಿಪಡಿಸಲು ಮತ್ತು ಅಭಿವೃದ್ಧಿಪಡಿಸಿದ್ದಾರೆ.ಎಡ್ವಿನ್ ಜೋಸೆಫ್ ಕೊಹ್ನ್, ಪ್ರೊಟೀನ್ ವಿಜ್ಞಾನಿ WW2 ಸಮಯದಲ್ಲಿ ಪ್ರೋಟೀನ್ ಶುದ್ಧೀಕರಣಕ್ಕಾಗಿ ಅನೇಕ ತಂತ್ರಗಳನ್ನು ಅಭಿವೃದ್ಧಿಪಡಿಸಿದರು.ರಕ್ತ ಪ್ಲಾಸ್ಮಾದ ಸೀರಮ್ ಅಲ್ಬುಮಿನ್ ಭಾಗವನ್ನು ಪ್ರತ್ಯೇಕಿಸಲು ಅವರು ಜವಾಬ್ದಾರರಾಗಿದ್ದರು, ಇದು ರಕ್ತನಾಳಗಳಲ್ಲಿ ಆಸ್ಮೋಟಿಕ್ ಒತ್ತಡವನ್ನು ಕಾಪಾಡಿಕೊಳ್ಳಲು ಮುಖ್ಯವಾಗಿದೆ.ಸೈನಿಕರನ್ನು ಜೀವಂತವಾಗಿಡಲು ಇದು ನಿರ್ಣಾಯಕವಾಗಿತ್ತು.
1953 ರಲ್ಲಿ ಫ್ರಾನ್ಸಿಸ್ ಕ್ರಿಕ್, ರೊಸಾಲಿಂಡ್ ಫ್ರಾಂಕ್ಲಿನ್ ಮತ್ತು ಜೇಮ್ಸ್ ವ್ಯಾಟ್ಸನ್ ಅವರೊಂದಿಗೆ ಡಿಎನ್ಎ ರಚನೆಯನ್ನು ನಿರ್ಧರಿಸಿದರು, ಇದು ನ್ಯೂಕ್ಲಿಯಿಕ್ ಆಸಿಡ್ ನ್ಯೂಕ್ಲಿಯೊಟೈಡ್ಗಳ ಎರಡು ಎಳೆಗಳ ಉದ್ದನೆಯ ಸರಪಳಿಗಳಿಂದ ಮಾಡಲ್ಪಟ್ಟಿದೆ ಎಂದು ತೋರಿಸುತ್ತದೆ.ಈ ಪ್ರಗತಿಯ ಆವಿಷ್ಕಾರವು ಮೆಸೆಲ್ಸನ್ ಮತ್ತು ಸ್ಟಾಲ್‌ಗೆ ದಾರಿ ಮಾಡಿಕೊಟ್ಟಿತು, ಅವರು ತಮ್ಮ 1958 ರ ಪ್ರಯೋಗದ ಸಮಯದಲ್ಲಿ ಡಿಎನ್ಎಯ ಅರೆ-ಸಂಪ್ರದಾಯ ಪ್ರತಿಕೃತಿಯನ್ನು ಪ್ರದರ್ಶಿಸಿದಂತೆ ಇ.
ನ್ಯೂಕ್ಲಿಯಿಕ್ ಆಮ್ಲದ ಹೊರತೆಗೆಯುವಿಕೆಯ ತಂತ್ರಗಳು
DNA ಹೊರತೆಗೆಯುವಿಕೆಯ 4 ಹಂತಗಳು ಯಾವುವು?
ಎಲ್ಲಾ ಹೊರತೆಗೆಯುವ ವಿಧಾನಗಳು ಒಂದೇ ಮೂಲಭೂತ ಹಂತಗಳಿಗೆ ಕುದಿಯುತ್ತವೆ.
ಜೀವಕೋಶದ ಅಡಚಣೆ.ಜೀವಕೋಶದ ಲೈಸಿಸ್ ಎಂದೂ ಕರೆಯಲ್ಪಡುವ ಈ ಹಂತವು, ಆಸಕ್ತಿಯ ನ್ಯೂಕ್ಲಿಯಿಕ್ ಆಮ್ಲಗಳನ್ನು ಹೊಂದಿರುವ ಅಂತರ್-ಕೋಶೀಯ ದ್ರವಗಳನ್ನು ಬಿಡುಗಡೆ ಮಾಡಲು ಜೀವಕೋಶದ ಗೋಡೆ ಮತ್ತು/ಅಥವಾ ಜೀವಕೋಶ ಪೊರೆಯನ್ನು ಒಡೆಯುವುದನ್ನು ಒಳಗೊಂಡಿರುತ್ತದೆ.
ಅನಗತ್ಯ ಅವಶೇಷಗಳನ್ನು ತೆಗೆಯುವುದು.ಇದು ಮೆಂಬರೇನ್ ಲಿಪಿಡ್‌ಗಳು, ಪ್ರೊಟೀನ್‌ಗಳು ಮತ್ತು ಇತರ ಅನಪೇಕ್ಷಿತ ನ್ಯೂಕ್ಲಿಯಿಕ್ ಆಮ್ಲಗಳನ್ನು ಒಳಗೊಂಡಿರುತ್ತದೆ, ಇದು ಡೌನ್‌ಸ್ಟ್ರೀಮ್ ಅಪ್ಲಿಕೇಶನ್‌ಗಳಿಗೆ ಅಡ್ಡಿಪಡಿಸುತ್ತದೆ.
ಪ್ರತ್ಯೇಕತೆ.ನೀವು ರಚಿಸಿದ ಕ್ಲಿಯರ್ಡ್ ಲೈಸೇಟ್‌ನಿಂದ ಆಸಕ್ತಿಯ ನ್ಯೂಕ್ಲಿಯಿಕ್ ಆಮ್ಲಗಳನ್ನು ಪ್ರತ್ಯೇಕಿಸಲು ಹಲವಾರು ವಿಭಿನ್ನ ಮಾರ್ಗಗಳಿವೆ, ಇದು ಎರಡು ಮುಖ್ಯ ವರ್ಗಗಳ ನಡುವೆ ಬರುತ್ತದೆ: ಪರಿಹಾರ ಆಧಾರಿತ ಅಥವಾ ಘನ ಸ್ಥಿತಿ (ಮುಂದಿನ ವಿಭಾಗವನ್ನು ನೋಡಿ).
ಏಕಾಗ್ರತೆ.ನ್ಯೂಕ್ಲಿಯಿಕ್ ಆಮ್ಲಗಳನ್ನು ಎಲ್ಲಾ ಇತರ ಮಾಲಿನ್ಯಕಾರಕಗಳು ಮತ್ತು ದುರ್ಬಲಗೊಳಿಸುವ ಪದಾರ್ಥಗಳಿಂದ ಪ್ರತ್ಯೇಕಿಸಿದ ನಂತರ, ಅವುಗಳನ್ನು ಹೆಚ್ಚು-ಕೇಂದ್ರೀಕೃತ ಎಲುಯೇಟ್ನಲ್ಲಿ ಪ್ರಸ್ತುತಪಡಿಸಲಾಗುತ್ತದೆ.
ಎರಡು ವಿಧದ ಹೊರತೆಗೆಯುವಿಕೆ
ನ್ಯೂಕ್ಲಿಯಿಕ್ ಆಮ್ಲದ ಹೊರತೆಗೆಯುವಿಕೆಯಲ್ಲಿ ಎರಡು ವಿಧಗಳಿವೆ - ಪರಿಹಾರ ಆಧಾರಿತ ವಿಧಾನಗಳು ಮತ್ತು ಘನ ಸ್ಥಿತಿಯ ವಿಧಾನಗಳು.ದ್ರಾವಣ ಆಧಾರಿತ ವಿಧಾನವನ್ನು ರಾಸಾಯನಿಕ ಹೊರತೆಗೆಯುವ ವಿಧಾನ ಎಂದೂ ಕರೆಯುತ್ತಾರೆ, ಏಕೆಂದರೆ ಇದು ಕೋಶವನ್ನು ಒಡೆಯಲು ಮತ್ತು ನ್ಯೂಕ್ಲಿಯಿಕ್ ವಸ್ತುವನ್ನು ಪ್ರವೇಶಿಸಲು ರಾಸಾಯನಿಕಗಳನ್ನು ಬಳಸುವುದನ್ನು ಒಳಗೊಂಡಿರುತ್ತದೆ.ಇದು ಫೀನಾಲ್ ಮತ್ತು ಕ್ಲೋರೊಫಾರ್ಮ್‌ನಂತಹ ಸಾವಯವ ಸಂಯುಕ್ತಗಳನ್ನು ಅಥವಾ ಕಡಿಮೆ ಹಾನಿಕಾರಕ ಮತ್ತು ಆದ್ದರಿಂದ ಹೆಚ್ಚು ಶಿಫಾರಸು ಮಾಡಲಾದ ಅಜೈವಿಕ ಸಂಯುಕ್ತಗಳಾದ ಪ್ರೊಟೀನೇಸ್ ಕೆ ಅಥವಾ ಸಿಲಿಕಾ ಜೆಲ್ ಅನ್ನು ಬಳಸಬಹುದು.
ಕೋಶವನ್ನು ಒಡೆಯಲು ವಿವಿಧ ರಾಸಾಯನಿಕ ಹೊರತೆಗೆಯುವ ವಿಧಾನಗಳ ಉದಾಹರಣೆಗಳು ಸೇರಿವೆ:
- ಪೊರೆಯ ಓಸ್ಮೋಟಿಕ್ ಛಿದ್ರ
- ಜೀವಕೋಶದ ಗೋಡೆಯ ಎಂಜೈಮ್ಯಾಟಿಕ್ ಜೀರ್ಣಕ್ರಿಯೆ
- ಪೊರೆಯ ಕರಗುವಿಕೆ
- ಮಾರ್ಜಕಗಳೊಂದಿಗೆ
- ಕ್ಷಾರ ಚಿಕಿತ್ಸೆಯೊಂದಿಗೆ
ಘನ ಸ್ಥಿತಿಯ ತಂತ್ರಗಳು, ಯಾಂತ್ರಿಕ ವಿಧಾನಗಳು ಎಂದೂ ಕರೆಯಲ್ಪಡುತ್ತವೆ, ಡಿಎನ್ಎ ಘನ ತಲಾಧಾರದೊಂದಿಗೆ ಹೇಗೆ ಸಂವಹನ ನಡೆಸುತ್ತದೆ ಎಂಬುದನ್ನು ಬಳಸಿಕೊಳ್ಳುತ್ತದೆ.ಮಣಿ ಅಥವಾ ಅಣುವನ್ನು ಆಯ್ಕೆ ಮಾಡುವ ಮೂಲಕ ಡಿಎನ್ಎ ಬಂಧಿಸುತ್ತದೆ ಆದರೆ ವಿಶ್ಲೇಷಕವು ಬಂಧಿಸುವುದಿಲ್ಲ, ಎರಡನ್ನೂ ಪ್ರತ್ಯೇಕಿಸಲು ಸಾಧ್ಯವಿದೆ.ಸಿಲಿಕಾ ಮತ್ತು ಮ್ಯಾಗ್ನೆಟಿಕ್ ಮಣಿಗಳನ್ನು ಬಳಸುವುದು ಸೇರಿದಂತೆ ಘನ-ಹಂತದ ಹೊರತೆಗೆಯುವ ತಂತ್ರಗಳ ಉದಾಹರಣೆಗಳು.
ಮ್ಯಾಗ್ನೆಟಿಕ್ ಬೀಡ್ ಎಕ್ಸ್ಟ್ರಾಕ್ಷನ್ ಅನ್ನು ವಿವರಿಸಲಾಗಿದೆ
ಮ್ಯಾಗ್ನೆಟಿಕ್ ಬೀಡ್ ಹೊರತೆಗೆಯುವ ವಿಧಾನ
ವೈಟ್‌ಹೆಡ್ ಇನ್‌ಸ್ಟಿಟ್ಯೂಟ್ ಸಂಶೋಧನಾ ಸಂಸ್ಥೆಗಾಗಿ ಟ್ರೆವರ್ ಹಾಕಿನ್ಸ್ ಸಲ್ಲಿಸಿದ US ಪೇಟೆಂಟ್‌ನಲ್ಲಿ ಮ್ಯಾಗ್ನೆಟಿಕ್ ಮಣಿಗಳನ್ನು ಬಳಸಿಕೊಂಡು ಹೊರತೆಗೆಯುವ ಸಾಮರ್ಥ್ಯವನ್ನು ಮೊದಲು ಗುರುತಿಸಲಾಯಿತು.ಘನ ಬೆಂಬಲ ವಾಹಕಕ್ಕೆ ಬಂಧಿಸುವ ಮೂಲಕ ಆನುವಂಶಿಕ ವಸ್ತುಗಳನ್ನು ಹೊರತೆಗೆಯಲು ಸಾಧ್ಯವಿದೆ ಎಂದು ಈ ಪೇಟೆಂಟ್ ಒಪ್ಪಿಕೊಂಡಿತು, ಅದು ಕಾಂತೀಯ ಮಣಿಯಾಗಿರಬಹುದು.ತತ್ತ್ವವು ನೀವು ಹೆಚ್ಚು ಕ್ರಿಯಾತ್ಮಕವಾಗಿರುವ ಮ್ಯಾಗ್ನೆಟಿಕ್ ಮಣಿಯನ್ನು ಬಳಸುತ್ತೀರಿ, ಅದರ ಮೇಲೆ ಆನುವಂಶಿಕ ವಸ್ತುವು ಬಂಧಿಸುತ್ತದೆ, ನಂತರ ಮಾದರಿಯನ್ನು ಹಿಡಿದಿರುವ ಹಡಗಿನ ಹೊರಭಾಗಕ್ಕೆ ಕಾಂತೀಯ ಬಲವನ್ನು ಅನ್ವಯಿಸುವ ಮೂಲಕ ಸೂಪರ್ನಾಟಂಟ್ನಿಂದ ಪ್ರತ್ಯೇಕಿಸಬಹುದು.
ಮ್ಯಾಗ್ನೆಟಿಕ್ ಬೀಡ್ ಎಕ್ಸ್ಟ್ರಾಕ್ಷನ್ ಅನ್ನು ಏಕೆ ಬಳಸಬೇಕು?
ಮ್ಯಾಗ್ನೆಟಿಕ್ ಬೀಡ್ ಹೊರತೆಗೆಯುವ ತಂತ್ರಜ್ಞಾನವು ಹೆಚ್ಚು ಪ್ರಚಲಿತವಾಗುತ್ತಿದೆ, ಇದು ಕ್ಷಿಪ್ರ ಮತ್ತು ಪರಿಣಾಮಕಾರಿ ಹೊರತೆಗೆಯುವ ಕಾರ್ಯವಿಧಾನಗಳಿಗೆ ಹೊಂದಿರುವ ಸಾಮರ್ಥ್ಯದಿಂದಾಗಿ.ಇತ್ತೀಚಿನ ದಿನಗಳಲ್ಲಿ ಸೂಕ್ತವಾದ ಬಫರ್ ವ್ಯವಸ್ಥೆಗಳೊಂದಿಗೆ ಹೆಚ್ಚು ಕ್ರಿಯಾತ್ಮಕವಾಗಿರುವ ಮ್ಯಾಗ್ನೆಟಿಕ್ ಮಣಿಗಳ ಬೆಳವಣಿಗೆಗಳು ಕಂಡುಬಂದಿವೆ, ಇದು ನ್ಯೂಕ್ಲಿಯಿಕ್ ಆಮ್ಲದ ಹೊರತೆಗೆಯುವಿಕೆಯ ಯಾಂತ್ರೀಕೃತಗೊಂಡ ಮತ್ತು ಅತ್ಯಂತ ಸಂಪನ್ಮೂಲ ಬೆಳಕು ಮತ್ತು ವೆಚ್ಚ-ಪರಿಣಾಮಕಾರಿಯಾದ ಕೆಲಸದ ಹರಿವನ್ನು ಸಾಧ್ಯವಾಗಿಸಿದೆ.ಅಲ್ಲದೆ, ಕಾಂತೀಯ ಮಣಿಯನ್ನು ಹೊರತೆಗೆಯುವ ವಿಧಾನಗಳು ಕೇಂದ್ರಾಪಗಾಮಿ ಹಂತಗಳನ್ನು ಒಳಗೊಂಡಿರುವುದಿಲ್ಲ, ಅದು ಬರಿಯ ಬಲಗಳಿಗೆ ಕಾರಣವಾಗಬಹುದು ಅದು ಡಿಎನ್ಎಯ ಉದ್ದವಾದ ತುಣುಕುಗಳನ್ನು ಒಡೆಯುತ್ತದೆ.ಇದರರ್ಥ ಡಿಎನ್ಎಯ ಉದ್ದವಾದ ಎಳೆಗಳು ಹಾಗೇ ಉಳಿದಿವೆ, ಇದು ಜೀನೋಮಿಕ್ಸ್ ಪರೀಕ್ಷೆಯಲ್ಲಿ ಮುಖ್ಯವಾಗಿದೆ.
ಪೋಸ್ಟ್ ಸಮಯ: ನವೆಂಬರ್-25-2022