ແນະນຳ
ການສະກັດເອົາອາຊິດນິວຄລີອິກແມ່ນຫຍັງ?
ໃນຄໍາສັບທີ່ງ່າຍດາຍທີ່ສຸດ, ການສະກັດເອົາອາຊິດນິວຄລີອິກແມ່ນການກໍາຈັດ RNA ແລະ / ຫຼື DNA ອອກຈາກຕົວຢ່າງແລະສ່ວນເກີນທັງຫມົດທີ່ບໍ່ຈໍາເປັນ.ຂະບວນການສະກັດເອົາອາຊິດນິວຄລີອິກແຍກອອກຈາກຕົວຢ່າງແລະໃຫ້ຜົນຜະລິດໃນຮູບແບບຂອງ eluate ເຂັ້ມຂຸ້ນ, ບໍ່ມີສານເຈືອຈາງແລະສານປົນເປື້ອນທີ່ສາມາດສົ່ງຜົນກະທົບຕໍ່ການນໍາໃຊ້ທາງລຸ່ມ.
ການນໍາໃຊ້ຂອງການສະກັດອາຊິດ Nucleic
ອາຊິດນິວຄລີອິກທີ່ບໍລິສຸດໄດ້ຖືກນໍາໃຊ້ໃນຫຼາຍໆຄໍາຮ້ອງສະຫມັກທີ່ແຕກຕ່າງກັນ, ຕັ້ງແຕ່ອຸດສາຫະກໍາທີ່ແຕກຕ່າງກັນ.ການດູແລສຸຂະພາບແມ່ນບາງທີພື້ນທີ່ທີ່ມັນຖືກໃຊ້ຫຼາຍທີ່ສຸດ, ມີ RNA ແລະ DNA ທີ່ບໍລິສຸດທີ່ຕ້ອງການສໍາລັບຈຸດປະສົງການທົດສອບທີ່ແຕກຕ່າງກັນ.
ການນໍາໃຊ້ຂອງການສະກັດອາຊິດ nucleic ໃນການດູແລສຸຂະພາບປະກອບມີ:
- ລໍາດັບການຜະລິດຕໍ່ໄປ (NGS)
- ການຂະຫຍາຍທີ່ອີງໃສ່ SNP Genotyping
- array-based Genotyping
- ຈໍາກັດການຍ່ອຍອາຫານຂອງເອນໄຊ
- ການວິເຄາະການນໍາໃຊ້ການປັບປຸງ Enzymes (ເຊັ່ນ: Ligation ແລະ Cloning)
ຍັງມີສາຂາອື່ນນອກເໜືອໄປຈາກການດູແລສຸຂະພາບທີ່ການສະກັດເອົາອາຊິດນິວຄລີອິກຖືກໃຊ້, ລວມທັງແຕ່ບໍ່ຈຳກັດພຽງແຕ່ການທົດສອບຄວາມເປັນພໍ່, ນິຕິສາດ ແລະ ຊີວະສາດ.
ປະຫວັດຫຍໍ້ຂອງການສະກັດເອົາອາຊິດນິວຄລີອິກ
ການສະກັດເອົາ DNAມີມາດົນນານ, ດ້ວຍການໂດດດ່ຽວທີ່ຮູ້ຈັກເປັນຄັ້ງທຳອິດໂດຍແພດໝໍຊາວສະວິດຊື່ Friedrich Miescher ໃນປີ 1869. Miescher ຫວັງວ່າຈະແກ້ໄຂຫຼັກການພື້ນຖານຂອງຊີວິດໂດຍການກຳນົດອົງປະກອບທາງເຄມີຂອງຈຸລັງ.ຫຼັງຈາກລົ້ມເຫລວກັບ lymphocytes, ລາວສາມາດໄດ້ຮັບສານ precipitate ຂອງ DNA ຈາກ leucocytes ທີ່ພົບເຫັນຢູ່ໃນຫນອງໃນຜ້າພັນບາດທີ່ຖືກຖິ້ມ.ລາວເຮັດສິ່ງນີ້ໂດຍການເພີ່ມອາຊິດແລະຫຼັງຈາກນັ້ນເປັນດ່າງເຂົ້າໄປໃນເຊນເພື່ອອອກຈາກ cytoplasm ຂອງເຊນ, ແລະຫຼັງຈາກນັ້ນໄດ້ພັດທະນາໂປໂຕຄອນເພື່ອແຍກ DNA ຈາກໂປຣຕີນອື່ນໆ.
ປະຕິບັດຕາມການຄົ້ນຄວ້າພື້ນຖານຂອງ Miescher, ນັກວິທະຍາສາດອື່ນໆຫຼາຍຄົນໄດ້ສືບຕໍ່ກ້າວຫນ້າແລະພັດທະນາເຕັກນິກເພື່ອແຍກແລະຊໍາລະ DNA.Edwin Joseph Cohn, ນັກວິທະຍາສາດທາດໂປຼຕີນໄດ້ພັດທະນາເຕັກນິກຫຼາຍຢ່າງສໍາລັບການຊໍາລະລ້າງທາດໂປຼຕີນໃນລະຫວ່າງ WW2.ລາວຮັບຜິດຊອບສໍາລັບການແຍກສ່ວນສ່ວນຫນຶ່ງຂອງ albumin serum ຂອງ plasma ເລືອດ, ເຊິ່ງເປັນສິ່ງສໍາຄັນໃນການຮັກສາຄວາມກົດດັນ osmotic ໃນເສັ້ນເລືອດ.ນີ້ແມ່ນສິ່ງສໍາຄັນສໍາລັບການຮັກສາທະຫານ.
ໃນປີ 1953 Francis Crick, ພ້ອມກັບ Rosalind Franklin ແລະ James Watson, ໄດ້ກໍານົດໂຄງສ້າງຂອງ DNA, ສະແດງໃຫ້ເຫັນວ່າມັນປະກອບດ້ວຍສອງສາຍຂອງຕ່ອງໂສ້ຍາວຂອງ nucleic acid nucleotides.ການຄົ້ນພົບຄວາມກ້າວໜ້ານີ້ໄດ້ເປີດທາງໃຫ້ Meselson ແລະ Stahl, ຜູ້ທີ່ສາມາດພັດທະນາອະນຸສັນຍາ centrifugation gradient ຄວາມຫນາແຫນ້ນເພື່ອແຍກ DNA ຈາກເຊື້ອແບັກທີເຣັຍ E. Coli ຍ້ອນວ່າພວກເຂົາສະແດງໃຫ້ເຫັນການຈໍາລອງແບບເຄິ່ງອະນຸລັກຂອງ DNA ໃນລະຫວ່າງການທົດລອງ 1958 ຂອງພວກເຂົາ.
ເຕັກນິກການສະກັດເອົາອາຊິດນິວຄລີອິກ
4 ຂັ້ນຕອນຂອງການສະກັດເອົາ DNA ແມ່ນຫຍັງ?
ວິທີການສະກັດເອົາທັງຫມົດຕົ້ມລົງໄປສູ່ຂັ້ນຕອນພື້ນຖານດຽວກັນ.
ການຂັດຂວາງເຊນ.ຂັ້ນຕອນນີ້, ເຊິ່ງເອີ້ນກັນວ່າ lysis ຈຸລັງ, ກ່ຽວຂ້ອງກັບການທໍາລາຍຝາຂອງເຊນແລະ / ຫຼືເຍື່ອເຊນ, ເພື່ອປ່ອຍນ້ໍາພາຍໃນຈຸລັງທີ່ປະກອບດ້ວຍອາຊິດນິວຄລີອິກທີ່ມີຄວາມສົນໃຈ.
ການກໍາຈັດສິ່ງເສດເຫຼືອທີ່ບໍ່ຕ້ອງການ.ນີ້ປະກອບມີ lipids ເຍື່ອ, ທາດໂປຼຕີນແລະອາຊິດ nucleic ທີ່ບໍ່ຕ້ອງການອື່ນໆທີ່ສາມາດແຊກແຊງກັບຄໍາຮ້ອງສະຫມັກລຸ່ມນ້ໍາ.
ການແຍກດ່ຽວ.ມີຫຼາຍວິທີທີ່ແຕກຕ່າງກັນທີ່ຈະແຍກອາຊິດນິວຄລີອິກທີ່ມີຄວາມສົນໃຈຈາກ lysate ທີ່ຖືກລຶບລ້າງທີ່ທ່ານສ້າງຂຶ້ນ, ເຊິ່ງຢູ່ລະຫວ່າງສອງປະເພດຕົ້ນຕໍ: ການແກ້ໄຂໂດຍອີງໃສ່ຫຼືລັດແຂງ (ເບິ່ງພາກຕໍ່ໄປ).
ຄວາມເຂັ້ມຂຸ້ນ.ຫຼັງຈາກທີ່ອາຊິດນິວຄລີອິກຖືກແຍກອອກຈາກສິ່ງປົນເປື້ອນ ແລະສານເຈືອຈາງອື່ນໆທັງໝົດແລ້ວ, ພວກມັນຈະຖືກນໍາສະເໜີໃນ eluate ທີ່ມີຄວາມເຂັ້ມຂຸ້ນສູງ.
ສອງປະເພດຂອງການສະກັດ
ມີສອງປະເພດຂອງການສະກັດເອົາອາຊິດ nucleic - ວິທີການແກ້ໄຂແລະວິທີການຂອງລັດແຂງ.ວິທີການທີ່ອີງໃສ່ການແກ້ໄຂແມ່ນເປັນທີ່ຮູ້ຈັກກັນໃນນາມວິທີການສະກັດເອົາສານເຄມີ, ຍ້ອນວ່າມັນກ່ຽວຂ້ອງກັບການໃຊ້ສານເຄມີເພື່ອທໍາລາຍເຊນແລະເຂົ້າເຖິງວັດສະດຸນິວເຄຼຍ.ນີ້ສາມາດຖືກນໍາໃຊ້ທັງທາດປະສົມອິນຊີເຊັ່ນ: phenol ແລະ chloroform, ຫຼືເປັນອັນຕະລາຍຫນ້ອຍແລະດັ່ງນັ້ນຈຶ່ງແນະນໍາທາດປະສົມອະນົງຄະທາດເຊັ່ນ Proteinase K ຫຼື silica gel.
ຕົວຢ່າງຂອງວິທີການສະກັດເອົາສານເຄມີທີ່ແຕກຕ່າງກັນເພື່ອທໍາລາຍເຊນປະກອບມີ:
- Osmotic rupturing ຂອງເຍື່ອ
- ການຍ່ອຍອາຫານ Enzymatic ຂອງຝາຫ້ອງ
- ການລະລາຍຂອງເຍື່ອ
- ມີສານຊັກຟອກ
- ດ້ວຍການປິ່ນປົວດ່າງ
ເຕັກນິກຂອງລັດແຂງ, ເຊິ່ງເອີ້ນກັນວ່າວິທີການກົນຈັກ, ກ່ຽວຂ້ອງກັບການຂຸດຄົ້ນວິທີການ DNA ພົວພັນກັບ substrate ແຂງ.ໂດຍການເລືອກລູກປັດຫຼືໂມເລກຸນທີ່ DNA ຈະຜູກມັດໃສ່ແຕ່ການວິເຄາະຈະບໍ່, ມັນເປັນໄປໄດ້ທີ່ຈະແຍກທັງສອງ.ຕົວຢ່າງຂອງເຕັກນິກການສະກັດເອົາໄລຍະແຂງລວມທັງການໃຊ້ຊິລິກາແລະລູກປັດແມ່ເຫຼັກ.
ການສະກັດເອົາລູກປັດແມ່ເຫຼັກອະທິບາຍ
ວິທີການສະກັດລູກປັດແມ່ເຫຼັກ
ທ່າແຮງສໍາລັບການສະກັດເອົາລູກປັດແມ່ເຫຼັກໄດ້ຖືກຮັບຮູ້ຄັ້ງທໍາອິດໃນສິດທິບັດຂອງສະຫະລັດທີ່ຍື່ນໂດຍ Trevor Hawkins, ສໍາລັບສະຖາບັນຄົ້ນຄ້ວາ Whitehead Institute.ສິດທິບັດນີ້ຍອມຮັບວ່າມັນເປັນໄປໄດ້ທີ່ຈະສະກັດສານພັນທຸກໍາໂດຍການຜູກມັດພວກມັນກັບຕົວຊ່ວຍທີ່ແຂງ, ເຊິ່ງອາດຈະເປັນລູກປັດແມ່ເຫຼັກ.ຫຼັກການແມ່ນວ່າທ່ານໃຊ້ລູກປັດແມ່ເຫຼັກທີ່ມີການເຄື່ອນໄຫວສູງທີ່ສານພັນທຸກໍາຈະຜູກມັດ, ເຊິ່ງຫຼັງຈາກນັ້ນສາມາດແຍກອອກຈາກ supernatant ໄດ້ໂດຍການໃຊ້ແຮງແມ່ເຫຼັກກັບພາຍນອກຂອງເຮືອທີ່ຖືຕົວຢ່າງ.
ເປັນຫຍັງຕ້ອງໃຊ້ການສະກັດລູກປັດແມ່ເຫຼັກ?
ເທກໂນໂລຍີການສະກັດເອົາລູກປັດແມ່ເຫຼັກກໍາລັງກາຍເປັນທີ່ແຜ່ຫຼາຍ, ເນື່ອງຈາກທ່າແຮງທີ່ມັນຖືສໍາລັບຂັ້ນຕອນການສະກັດເອົາຢ່າງໄວວາແລະມີປະສິດທິພາບ.ໃນຊ່ວງເວລາມໍ່ໆມານີ້, ໄດ້ມີການພັດທະນາຂອງລູກປັດແມ່ເຫຼັກທີ່ມີປະສິດຕິພາບສູງທີ່ມີລະບົບ buffer ທີ່ເຫມາະສົມ, ເຊິ່ງເຮັດໃຫ້ການສະກັດເອົາອາຊິດນິວຄລີອິກອັດຕະໂນມັດທີ່ເປັນໄປໄດ້ແລະຂະບວນການເຮັດວຽກທີ່ມີຄວາມສະຫວ່າງຂອງຊັບພະຍາກອນຫຼາຍແລະປະຫຍັດຄ່າໃຊ້ຈ່າຍ.ນອກຈາກນີ້, ວິທີການສະກັດເອົາລູກປັດແມ່ເຫຼັກບໍ່ກ່ຽວຂ້ອງກັບຂັ້ນຕອນການສູນກາງທີ່ສາມາດເຮັດໃຫ້ກໍາລັງ shear ທີ່ທໍາລາຍຊິ້ນສ່ວນຂອງ DNA ທີ່ຍາວກວ່າ.ນີ້ຫມາຍຄວາມວ່າສາຍພັນ DNA ທີ່ຍາວກວ່າຍັງຄົງ intact, ເຊິ່ງເປັນສິ່ງສໍາຄັນໃນການທົດສອບ genomics.
ເວລາປະກາດ: 25-11-2022