Оршил
Нуклейн хүчлийн олборлолт гэж юу вэ?
Хамгийн энгийнээр хэлбэл, нуклейн хүчлийн олборлолт нь дээжээс РНХ ба/эсвэл ДНХ болон шаардлагагүй бүх илүүдлийг арилгах явдал юм.Олборлох үйл явц нь дээжээс нуклейн хүчлийг тусгаарлаж, тэдгээрийг шингэрүүлэгч болон бохирдуулагч бодисоос ангид төвлөрсөн элюат хэлбэрээр гаргаж авдаг.
Нуклейн хүчлийн олборлолтын хэрэглээ
Цэвэршүүлсэн нуклейн хүчлүүд нь янз бүрийн салбарт олон янзын хэрэглээнд ашиглагддаг.Эрүүл мэндийн тусламж үйлчилгээ нь янз бүрийн туршилтын зорилгоор цэвэршүүлсэн РНХ, ДНХ шаардлагатай байдаг хамгийн их ашиглагддаг салбар юм.
Эрүүл мэндийн салбарт нуклейн хүчлийн хандыг ашиглахад дараахь зүйлс орно.
- Дараагийн үеийн дараалал (NGS)
- Олшруулалтад суурилсан SNP Genotyping
- Массив дээр суурилсан генотип
- Хоол боловсруулах ферментийг хязгаарлах
- Өөрчлөлтийн фермент ашиглан шинжилгээ хийх (жишээ нь, холбогч ба клончлох)
Түүнчлэн нуклейн хүчлийн хандыг ашигладаг эрүүл мэндийн салбараас гадна эцэг тогтоох шинжилгээ, шүүх эмнэлэг, геномик зэрэг бусад салбарууд байдаг.
Нуклейн хүчлийн олборлолтын товч түүх
ДНХ олборлолтАнхны мэдэгдэж буй тусгаарлалтыг Швейцарийн эмч Фридрих Мишер 1869 онд хийж байсан нь маш эртний түүхтэй. Мишер эсийн химийн найрлагыг тодорхойлох замаар амьдралын үндсэн зарчмуудыг шийднэ гэж найдаж байв.Лимфоцитууд дутагдсаны дараа тэрээр хаясан боолт дээрх идээт эсээс олдсон лейкоцитуудаас ДНХ-ийн бүдүүлэг тунадасыг олж авч чадсан.Тэрээр эсийн цитоплазмаас гарахын тулд эсэд хүчил, дараа нь шүлт нэмж, дараа нь ДНХ-ийг бусад уурагаас салгах протоколыг боловсруулсан.
Мишерийн шинэлэг судалгааны дараа бусад олон эрдэмтэд ДНХ-ийг тусгаарлах, цэвэршүүлэх арга техникийг ахиулж, хөгжүүлсэн.Уургийн эрдэмтэн Эдвин Жозеф Кон Дэлхийн 2-р дайны үед уураг цэвэршүүлэх олон аргыг боловсруулсан.Тэрээр цусны сийвэн дэх цусны сийвэн дэх осмосын даралтыг хадгалахад чухал ач холбогдолтой ийлдэс дэх альбумин хэсгийг тусгаарлах үүрэгтэй байв.Энэ нь цэргүүдийг амьд байлгахад чухал ач холбогдолтой байв.
1953 онд Фрэнсис Крик Розалинд Франклин, Жеймс Ватсон нарын хамт ДНХ-ийн бүтцийг тодорхойлж, энэ нь нуклейн хүчлийн нуклеотидын урт гинжний хоёр хэлхээнээс бүрддэг болохыг харуулсан.Энэхүү нээлтийн нээлт нь Меселсон, Стал хоёрын 1958 оны туршилтын үеэр ДНХ-ийн хагас консерватив хуулбарыг харуулсан E. Coli бактериас ДНХ-ийг тусгаарлах нягтралын градиент центрифугийн протоколыг боловсруулж чадсан юм.
Нуклейн хүчлийг гаргаж авах арга техник
ДНХ задлах 4 үе шат юу вэ?
Олборлох бүх аргууд нь ижил үндсэн үе шатууд хүртэл буцалгана.
Эсийн тасалдал.Эсийн задрал гэж нэрлэгддэг энэ үе шат нь нуклейн хүчлийг агуулсан эсийн доторх шингэнийг гадагшлуулахын тулд эсийн хана ба/эсвэл эсийн мембраныг задалдаг.
Хүсээгүй хог хаягдлыг зайлуулах.Үүнд мембраны липид, уураг болон бусад хүсээгүй нуклейн хүчлүүд багтдаг бөгөөд эдгээр нь доод урсгалын хэрэглээнд саад учруулдаг.
Тусгаарлалт.Таны үүсгэсэн цэвэршүүлсэн лизатаас сонирхож буй нуклейн хүчлүүдийг тусгаарлах хэд хэдэн янзын арга байдаг бөгөөд эдгээр нь уусмалд суурилсан эсвэл хатуу төлөв гэсэн хоёр үндсэн ангилалд багтдаг (дараагийн хэсгийг үзнэ үү).
Төвлөрөл.Нуклейн хүчлийг бусад бүх бохирдуулагч болон шингэрүүлэгчээс тусгаарласны дараа тэдгээрийг өндөр концентрацитай элюат хэлбэрээр үзүүлнэ.
Олборлолтын хоёр төрөл
Нуклейн хүчлийг гаргаж авах хоёр төрөл байдаг - уусмалд суурилсан арга ба хатуу төлөвт арга.Уусмалд суурилсан аргыг химийн аргаар задлах арга гэж нэрлэдэг бөгөөд энэ нь эсийг задлах, нуклейн материал руу нэвтрэхэд химийн бодис ашиглах явдал юм.Энэ нь фенол, хлороформ зэрэг органик нэгдлүүдийн аль нэгийг, эсвэл бага хор хөнөөлтэй тул Proteinase K эсвэл цахиурын гель зэрэг органик бус нэгдлүүдийг ашиглахыг зөвлөж байна.
Эсийг задлах янз бүрийн химийн олборлох аргуудын жишээнд:
- Мембрангийн осмосын хагарал
- Эсийн хананы ферментийн задрал
- Мембраныг уусгах
- Угаалгын нунтагтай
- Шүлтлэг эмчилгээтэй
Механик арга гэж нэрлэгддэг хатуу төлөвт техник нь ДНХ-ийн хатуу субстраттай хэрхэн харьцаж байгааг ашиглах явдал юм.ДНХ нь холбогддог ч задлан шинжилдэггүй молекулыг сонгосноор энэ хоёрыг салгах боломжтой.Цахиур болон соронзон бөмбөлгүүдийг ашиглах зэрэг хатуу фазын олборлох аргуудын жишээ.
Соронзон ирмэгийн олборлолтыг тайлбарлав
Соронзон ирмэгийг олборлох арга
Соронзон бөмбөлгүүдийг ашиглан олборлох боломжийг анх Тревор Хоукинсийн Whitehead хүрээлэнгийн судалгааны байгууллагад гаргасан АНУ-ын патентад хүлээн зөвшөөрсөн.Энэхүү патент нь генетикийн материалыг соронзон бөмбөлгүүдийг байж болох хатуу тулгуур зөөгчтэй холбох замаар гаргаж авах боломжтой гэдгийг хүлээн зөвшөөрсөн.Үүний зарчим нь та генетикийн материалд наалддаг өндөр функциональ соронзон ирмэгийг ашиглах бөгөөд дараа нь дээжийг барьж буй савны гадна талд соронзон хүч хэрэглэх замаар супернатантаас салгаж болно.
Яагаад соронзон ирмэгийн хандыг ашиглах хэрэгтэй вэ?
Соронзон ирмэгийн олборлох технологи нь хурдан бөгөөд үр дүнтэй олборлох процедурыг эзэмшдэг учраас улам бүр түгээмэл болж байна.Сүүлийн үед тохиромжтой буфер систем бүхий өндөр ажиллагаатай соронзон бөмбөлгүүдийг бүтээж байгаа нь нуклейн хүчлийн олборлолтыг автоматжуулах, ажлын урсгалыг маш хөнгөн, зардал багатай болгох боломжтой болсон.Түүнчлэн, соронзон ирмэгийг олборлох аргууд нь ДНХ-ийн урт хэсгүүдийг задлахад зүсэх хүчийг үүсгэдэг центрифугийн үе шатуудыг агуулдаггүй.Энэ нь ДНХ-ийн урт хэлхээнүүд бүрэн бүтэн хэвээр үлдэнэ гэсэн үг бөгөөд энэ нь геномикийн шинжилгээнд чухал ач холбогдолтой юм.
Шуудангийн цаг: 2022 оны 11-р сарын 25