Enkonduko
Kio estas Nukleika Acida Eltiro?
En la plej simpla el esprimoj, nuklea acida ekstraktado estas la forigo de la RNA kaj/aŭ DNA de specimeno kaj la tuta troo kiu ne estas necesa.La procezo de ekstraktado izolas la nukleajn acidojn de specimeno kaj donas ilin en la formo de densa eluato, libera de diluantoj kaj poluaĵoj kiuj povus influi iujn kontraŭfluajn aplikojn.
Aplikoj de Nuklea Acida Eltiro
Purigitaj nukleaj acidoj estas uzitaj en amaso da malsamaj aplikoj, intervalante trans multoblaj malsamaj industrioj.Sanservo eble estas la areo kie ĝi estas plej uzata, kun purigita RNA kaj DNA necesa por multaj diversaj testaj celoj.
Aplikoj de nukleaacida ekstraktado en sanservo inkluzivas:
- Venonta Generacia Sekvencado (NGS)
- Plifortig-bazita SNP Genotipado
- Genotipado bazita en tabelo
- Restrikta Enzima Digesto
- Analizoj uzante Modifajn Enzimojn (ekz. Ligado kaj Klonado)
Ekzistas ankaŭ aliaj kampoj preter kuracado kie nuklea acida ekstraktado estas uzita, inkluzive de sed ne limigitaj al patrectestado, jurmedicino kaj genomiko.
Mallonga Historio de Nuklea Acida Ekstraktado
DNA-eltirodatiĝas de longa tempo, kun la unua konata izolado estis farita fare de svisa kuracisto nomita Friedrich Miescher en 1869. Miescher esperis solvi la fundamentajn principojn de vivo determinante la kemian konsiston de ĉeloj.Post malsukcesado kun limfocitoj, li povis akiri krudan precipitaĵon de DNA de leŭkocitoj trovitaj en puso sur forĵetitaj bandaĝoj.Li faris tion aldonante acidon kaj tiam alkalon al la ĉelo por forlasi la citoplasmon de la ĉelo, kaj tiam evoluigis protokolon por apartigi la DNA de la aliaj proteinoj.
Sekvante la pioniran esploradon de Miescher, multaj aliaj sciencistoj daŭriĝis por avanci kaj evoluigi teknikojn por izoli kaj purigi DNA.Edwin Joseph Cohn, proteinsciencisto evoluigis multajn teknikojn por proteinpurigo dum WW2.Li respondecis pri izolado de la serumalbuminfrakcio de sangoplasmo, kio estas grava en konservado de la osmoza premo en la sangaj glasoj.Tio estis decida por reteni soldatojn vivantaj.
En 1953 Francis Crick, kune kun Rosalind Franklin kaj James Watson, determinis la strukturon de DNA, montrante ke ĝi konsistas el du fadenoj de longaj ĉenoj de nukleaj acidaj nukleotidoj.Tiu normŝanĝa eltrovaĵo pavimis laŭ la manieron por Meselson kaj Stahl, kiuj povis evoluigi densecgradienta centrifuga protokolon por izoli DNA de E. Coli-bakterioj kiam ili montris la duonkonservativan reproduktadon de DNA dum sia 1958 eksperimento.
Teknikoj de Nuklea Acida Eltiro
Kio estas la 4 stadioj de DNA-eltiro?
Ĉiuj eltiraj metodoj resumas al la samaj fundamentaj paŝoj.
Ĉela Disrompo.Ĉi tiu stadio, ankaŭ konata kiel ĉela lizo, implikas malkonstrui la ĉelan muron kaj/aŭ la ĉelan membranon, por liberigi la intraĉelajn fluidojn enhavantajn la interesajn nukleajn acidojn.
Forigo de Nedezirataj Derompaĵoj.Ĉi tio inkluzivas membranajn lipidojn, proteinojn kaj aliajn nedeziratajn nukleajn acidojn, kiuj povas malhelpi kontraŭfluajn aplikojn.
Izolo.Estas kelkaj malsamaj manieroj izoli la interesajn nukleajn acidojn de la purigita lisato, kiun vi kreis, kiuj estas inter du ĉefaj kategorioj: solvbazita aŭ solida stato (vidu sekvan sekcion).
Koncentriĝo.Post kiam la nukleaj acidoj estis izolitaj de ĉiuj aliaj poluaĵoj kaj diluaĵoj, ili estas prezentitaj en tre densigita eluato.
La Du Tipoj de Eltiro
Estas du specoj de nukleaacida eltiro - solvo bazitaj metodoj kaj solidsubstancaj metodoj.La solvo bazita metodo ankaŭ estas konata kiel la kemia eltira metodo, ĉar ĝi implikas uzi kemiaĵojn por malkonstrui la ĉelon kaj aliri la nuklean materialon.Ĉi tio povas uzi aŭ organikajn komponaĵojn kiel fenolo kaj kloroformo, aŭ la malpli damaĝajn kaj tial pli rekomenditajn neorganikajn komponaĵojn kiel Proteinase K aŭ silika ĝelo.
Ekzemploj de malsamaj kemiaj eltiraj metodoj por malkonstrui ĉelon inkluzivas:
- Osmoza rompo de membrano
- Enzimata digesto de ĉela muro
- Solvo de membrano
- Kun lesivoj
- Kun alkala traktado
Solidsubstancaj teknikoj, ankaŭ konataj kiel mekanikaj metodoj, implikas ekspluati kiel DNA interagas kun solida substrato.Elektante bidon aŭ molekulon al kiu la DNA ligos sed la analito ne faros, estas eble apartigi la du.Ekzemploj de solid-fazaj ekstraktaj teknikoj inkluzive de uzado de silicoksido kaj magnetaj bidoj.
Klarigata Magneta Bida Eltiro
La Magneta Bida Eltira Metodo
La potencialo por ekstraktado uzanta magnetajn bidojn unue estis rekonita en usona patento arkivita fare de Trevor Hawkins, por la Whitehead Institute esplorinstitucio.Tiu patento agnoskis ke estis eble ĉerpi genetikan materialon ligante ilin al solida subtenportilo, kiu povus esti magneta artperlo.La principo estas, ke vi uzas tre funkciigitan magnetan bidon, sur kiun ligos la genetika materialo, kiu tiam povas esti apartigita de la supernatante aplikante magnetan forton al la ekstero de la ŝipo tenanta la provaĵon.
Kial Uzi Magnetan Bida Eltiro?
Magneta bila ekstrakta teknologio iĝas ĉiam pli ĝenerala, pro la potencialo kiun ĝi tenas por rapidaj kaj efikaj eltiraj proceduroj.En lastatempaj tempoj okazis evoluoj de tre funkciigitaj magnetaj bidoj kun taŭgaj bufrosistemoj, kiuj ebligis aŭtomatigon de nukleaacida eltiro kaj laborfluon kiu estas tre rimeda malpeza kaj kostefika.Ankaŭ, magnet-perlaj ekstraktadmetodoj ne implikas la centrifugadŝtupojn kiuj povas kaŭzi tondfortojn kiuj rompas pli longajn pecojn de DNA.Ĉi tio signifas, ke pli longaj fadenoj de DNA restas sendifektaj, kio estas grava en genomika testado.
Afiŝtempo: Nov-25-2022