Réamhrá
Cad is Eastóscadh Aigéad Núicléach ann?
Ar na téarmaí is simplí, is éard is eastóscadh aigéid núicléigh ann an RNA agus/nó DNA a bhaint as sampla agus an farasbarr ar fad nach bhfuil riachtanach.Déanann próiseas an eastósctha na haigéid núicléacha a leithlisiú ó shampla agus táirgeann sé iad i bhfoirm eluáit tiubhaithe, saor ó chaolaitheoirí agus ábhar salaithe a d’fhéadfadh cur isteach ar aon fheidhmchláir le sruth.
Feidhm Aistarraingthe Aigéad Núicléigh
Úsáidtear aigéid núicléacha íonaithe i raidhse feidhmeanna éagsúla, ag réimsiú thar iliomad tionscal éagsúil.Is dócha gurb é cúram sláinte an réimse is mó a úsáidtear é, agus tá gá le RNA íonaithe agus DNA chun críocha tástála éagsúla.
Áirítear le feidhmeanna eastóscadh aigéid núicléigh i gcúram sláinte:
- Seicheamhú don Chéad Ghlúin Eile (NGS)
- Géinitíopáil SNP bunaithe ar aimpliú
- Géinitíopáil bunaithe ar eagar
- Díleá Einsím Srianta
- Anailísí ag baint úsáide as einsímí modhnaithe (m.sh. Ligation agus Clónáil)
Tá réimsí eile lasmuigh de chúram sláinte ann freisin ina n-úsáidtear eastóscadh aigéid núicléigh, lena n-áirítear, ach gan a bheith teoranta do thástáil atharthachta, fóiréinsic agus géanóm.
Stair Achomair ar Eastóscadh Aigéad Núicléach
eastóscadh DNATéann sé i bhfad siar, agus rinne dochtúir Eilvéiseach darbh ainm Friedrich Miescher an chéad leithlisiú aitheanta i 1869. Bhí Miescher ag súil le bunphrionsabail na beatha a réiteach trí chomhdhéanamh ceimiceach na gceall a chinneadh.Tar éis teip le limficítí, bhí sé in ann deascán amh DNA a fháil ó leucocytes a fuarthas i bpúnna ar bindealáin caite.Rinne sé é seo trí aigéad agus ansin alcaile a chur leis an gcill chun cíteaplasma na cille a fhágáil, agus ansin d'fhorbair sé prótacal chun an DNA a scaradh ó na próitéiní eile.
Tar éis taighde ceannródaíoch Miescher, tá go leor eolaithe eile tar éis dul chun cinn agus teicnící a fhorbairt chun DNA a leithlisiú agus a íonú.D'fhorbair Edwin Joseph Cohn, eolaí próitéin go leor teicnící le haghaidh íonú próitéine le linn an Dara Cogadh Domhanda.Bhí sé freagrach as an codán serum albaimin den phlasma fola a leithlisiú, rud atá tábhachtach chun an brú osmotic sna soithigh fola a choinneáil.Bhí sé seo ríthábhachtach chun saighdiúirí a choinneáil beo.
I 1953 chinn Francis Crick, in éineacht le Rosalind Franklin agus James Watson, struchtúr DNA, ag taispeáint go raibh sé comhdhéanta de dhá shnáithe de shlabhraí fada de núicléatídí aigéid núicléacha.Réitigh an fionnachtain cheannródaíoch seo an bealach do Meselson agus Stahl, a bhí in ann prótacal lártheifneoraithe grádáin dlúis a fhorbairt chun DNA a leithlisiú ó bhaictéir E. Coli mar a léirigh siad macasamhlú leathchoimeádach DNA le linn a dturgnaimh i 1958.
Teicnící Eastóscadh Aigéad Núicléach
Cad iad na 4 chéim d'eastóscadh DNA?
Gach modhanna eastósctha boil síos go dtí na céimeanna bunúsacha céanna.
Briseadh Cille.Is éard atá i gceist leis an gcéim seo, ar a dtugtar lysis cille freisin, an balla cille agus/nó an chillscannán a bhriseadh síos, chun na sreabhán laistigh den chealla ina bhfuil na haigéid núicléacha is díol spéise a scaoileadh.
Deireadh a chur le smionagar nach dteastaíonn.Áirítear leis seo lipidí membrane, próitéiní agus aigéid núicléacha eile nach dteastaíonn a d'fhéadfadh cur isteach ar fheidhmchláir iartheachtacha.
Leithlis.Tá roinnt bealaí éagsúla ann chun aigéid núicléacha spéise a leithlisiú ón lísáit imréitigh a chruthaigh tú, a thagann idir dhá phríomhchatagóir: bunaithe ar thuaslagán nó staid sholadach (féach an chéad chuid eile).
Tiúchan.Tar éis na haigéid núicléacha a leithlisiú ó gach éilleán agus caolaitheoir eile, cuirtear i láthair iad i eluáit ard-tiubhaithe.
An Dá Chineál Eastósctha
Tá dhá chineál eastóscadh aigéid núicléigh – modhanna bunaithe ar thuaslagadh agus modhanna soladstaide.Tugtar an modh eastósctha ceimiceach ar an modh bunaithe ar thuaslagán freisin, toisc go mbaineann sé úsáid as ceimiceáin chun an chill a bhriseadh síos agus rochtain a fháil ar an ábhar núicléach.D'fhéadfadh sé seo a bheith ag baint úsáide as comhdhúile orgánacha cosúil le feanól agus clóraform, nó comhdhúile neamhorgánacha nach bhfuil chomh díobhálach agus a mholtar níos mó mar Próitéineas K nó glóthach shilice.
I measc samplaí de mhodhanna éagsúla eastósctha ceimiceacha chun cill a bhriseadh síos tá:
- Osmotic réabfaidh an membrane
- Díleá einsímeach an bhalla cille
- Intuaslagthacht an scannáin
- Le glantaigh
- Le cóireáil alcaile
Baineann teicnící staid sholadaigh, ar a dtugtar modhanna meicniúla freisin, le leas a bhaint as an gcaoi a n-idirghníomhaíonn DNA le foshraith sholadach.Má roghnaítear coirnín nó móilín a gceanglóidh an DNA air ach nach ndéanfaidh an anailít é, is féidir an dá cheann a scaradh.Samplaí de theicnící eastósctha soladphas lena n-áirítear úsáid a bhaint as sílice agus coirníní maighnéadacha.
Míniú ar Eastóscadh Bead Maighnéadach
An Modh eastóscadh Coirníní Maighnéadacha
Aithníodh an acmhainneacht le haghaidh eastóscadh ag baint úsáide as coirníní maighnéadacha ar dtús i bpaitinn SAM a chomhdaigh Trevor Hawkins, d'institiúid taighde Institiúid Whitehead.D'admhaigh an paitinn seo go raibh sé indéanta ábhar géiniteach a bhaint as trí iad a cheangal le hiompróir tacaíochta soladach, rud a d'fhéadfadh a bheith ina choirnín maighnéadach.Is é an prionsabal ná go n-úsáideann tú coirnín maighnéadach an-fheidhmiúil ar a gceanglóidh an t-ábhar géiniteach air, ar féidir ansin é a dheighilt ón bhfeochadán trí fhórsa maighnéadach a chur i bhfeidhm ar an taobh amuigh den soitheach a bhfuil an sampla ina sheilbh aige.
Cén fáth Úsáid Sliocht Bead Maighnéadach?
Tá teicneolaíocht eastóscadh coirníní maighnéadacha ag éirí níos forleithne, mar gheall ar an bpoitéinseal atá ann do nósanna imeachta eastósctha tapa agus éifeachtacha.Le blianta beaga anuas tá forbairtí déanta ar choirníní maighnéadacha an-fheidhmiúil le córais maolánacha oiriúnacha, rud a d'fhág go bhféadfaí eastóscadh aigéid núicléigh a uathoibriú agus sreabhadh oibre atá an-éadrom ó thaobh acmhainní de agus cost-éifeachtúil.Chomh maith leis sin, ní bhaineann modhanna eastósctha coirníní maighnéadacha leis na céimeanna lártheifneoraithe a d’fhéadfadh fórsaí lomadh a chruthú a bhriseann píosaí DNA níos faide.Ciallaíonn sé seo go bhfanann snáitheanna níos faide DNA slán, rud atá tábhachtach i dtástáil ghéanómaíochta.
Am postála: Nov-25-2022