Кереш сүз
Нуклеин кислотасы алу нәрсә ул?
Иң гади сүзләр белән әйткәндә, нуклеин кислотасын чыгару - РНКны һәм / яки ДНКны үрнәктән чыгару һәм кирәк булмаган барлык артыклык.Чыгару процессы нуклеин кислоталарын үрнәктән аера һәм концентрацияләнгән элуат формасында бирә, эремчекләрдән һәм пычраткыч матдәләрдән азат була.
Нуклеин кислотасын чыгару кушымталары
Чистартылган нуклеин кислоталары төрле кушымталарда кулланыла, төрле тармакларда.Сәламәтлек саклау, мөгаен, иң күп кулланылган өлкә, чистартылган РНК һәм ДНК төрле сынау максатларында кирәк.
Сәламәтлек саклауда нуклеин кислотасы алу кушымталары:
- Киләсе буын эзлеклелеге (NGS)
- көчәйтү нигезендә SNP генотиплау
- Аррей нигезендә генотип ясау
- Ферментларны чикләү
- Ферментларны үзгәртү анализы (мәсәлән, Лигация һәм Клонлау)
Сәламәтлек саклау өлкәсеннән тыш башка өлкәләр дә бар, анда нуклеин кислотасы чыгару кулланыла, шул исәптән ата-аналар сынаулары, суд-медицина һәм геномика белән генә чикләнми.
Нуклеин кислотасын чыгаруның кыскача тарихы
ДНК чыгаруБеренче билгеле изоляция 1869-нчы елда Фридрих Мишер исемле Швейцария табибы тарафыннан башкарылган. Мишер күзәнәкләрнең химик составын билгеләү белән тормышның төп принципларын чишәргә өметләнгән.Лимфоцитлар белән эшләмәгәннән соң, ул ташландык бинтларда эре тапкан лейкоцитлардан ДНКның чиста явым-төшемен ала алды.Ул моны күзәнәк цитоплазмасын калдыру өчен күзәнәккә кислота, аннары алкалы кушып эшләде, аннары ДНКны башка протеиннардан аеру өчен протокол эшләде.
Мишерның төп тикшеренүләреннән соң, башка күп галимнәр ДНКны изоляцияләү һәм чистарту техникасын алга җибәрделәр.Протеин галиме Эдвин Джозеф Кон Бөек Ватан сугышы вакытында протеинны чистарту өчен күп техника уйлап тапты.Ул кан тамырларында осмотик басымны саклап калуда мөһим булган кан плазмасының альбумин фракциясен изоляцияләү өчен җаваплы иде.Бу солдатларны исән калдыру өчен бик мөһим иде.
1953-нче елда Фрэнсис Крик, Розалинд Франклин һәм Джеймс Уотсон белән бергә, ДНК структурасын билгеләделәр, аның нуклеин кислотасы нуклеотидларының озын чылбырыннан торганын күрсәттеләр.Бу ачыш Месельсон белән Стахлга юл ачты, алар тыгызлыклы градиент центрифугация протоколын эшли алганнар, ДНКны Э.Коли бактерияләреннән изоляцияләү өчен, алар 1958 тәҗрибәсе вакытында ДНКның ярым консерватив репликасын күрсәткәннәр.
Нуклеин кислотасын алу ысуллары
ДНК алуның 4 этапы нинди?
Барлык чыгару ысуллары да бер үк төп адымнарга кадәр кайнап торалар.
Күзәнәкнең өзелүе.Бу этап, күзәнәк лизисы дип тә атала, күзәнәкнең диварын һәм / яки күзәнәк мембранасын җимерүне үз эченә ала, кызыклы нуклеин кислоталары булган күзәнәк эчендәге сыеклыкларны чыгару өчен.
Кирәк булмаган чүп-чарны бетерү.Бу мембрана липидларын, протеиннарны һәм башка кирәкмәгән нуклеин кислоталарын үз эченә ала, алар агымдагы кушымталарга комачаулый ала.
Изоляция.Кызыклы нуклеин кислоталарын сез ясаган чистартылган лизаттан аеруның берничә төрле ысулы бар, алар ике төп категориягә керәләр: чишелеш нигезендә яки каты хәл (киләсе бүлекне карагыз).
Концентрация.Нуклеин кислоталары бүтән пычраткыч матдәләрдән һәм эреткечләрдән аерылганнан соң, алар югары концентрацияләнгән элуатта тәкъдим ителә.
Чыгаруның ике төре
Нуклеин кислотасын чыгаруның ике төре бар - чишелешкә нигезләнгән методлар һәм каты дәүләт ысуллары.Чишелешкә нигезләнгән ысул химик чыгару ысулы буларак та билгеле, чөнки ул күзәнәкне җимерү һәм нуклеик материалга керү өчен химик матдәләр куллануны үз эченә ала.Бу фенол һәм хлороформ кебек органик кушылмаларны кулланырга мөмкин, яисә азрак зарарлы, шуңа күрә Протеиназ К яки кремний гел кебек органик булмаган кушылмалар кулланырга мөмкин.
Күзәнәкне җимерү өчен төрле химик чыгару ысулларына мисаллар керә:
- Мембрананың осмотик ярылуы
- Күзәнәк стенасының энзиматик ашкайнатуы
- Мембрананың эрүчәнлеге
- юу юлы белән
- эшкәртү белән
Каты дәүләт техникасы, шулай ук механик ысуллар буларак та билгеле, ДНКның каты субстрат белән үзара бәйләнешен куллануны үз эченә ала.ДНК бәйләячәк мишәр яки молекуланы сайлап, аналитик булмый, икесен аерырга мөмкин.Силикат һәм магнит бусы куллануны кертеп, каты фазалы чыгару техникасы үрнәкләре.
Магнит мишәр чыгару аңлатыла
Магнит мишәр чыгару ысулы
Магнит бусы кулланып чыгару потенциалы беренче тапкыр АКШ патентында Тревор Хоукинс Уайтхед институтының тикшеренү институты өчен танылды.Бу патент генетик материалны магнит мишәр булырга мөмкин булган каты таянычка бәйләп чыгару мөмкинлеген таныды.Принцип шунда: сез бик функциональ магнит мишәр кулланасыз, аның өстенә генетик материал бәйләнәчәк, аннары үрнәкне тоткан корабның тышкы ягына магнит көче кулланып, супернанттан аерыла ала.
Ни өчен магнит мишәр чыгаруны кулланырга?
Магнит мишәр чыгару технологиясе тиз һәм эффектив чыгару процедуралары өчен булган потенциал аркасында киң тарала бара.Соңгы вакытта югары буфер системалары булган югары функциональ магнит мишәрләр эшләнде, алар нуклеин кислотасын чыгаруны автоматлаштырырга мөмкинлек бирделәр, ресурс җиңел һәм чыгымлы.Шулай ук, магнит мишәр алу ысуллары центрифугация адымнарын үз эченә алмый, алар ДНКның озын кисәкләрен таркатучы кыру көченә китерергә мөмкин.Димәк, геномика тестында мөһим булган ДНКның озын юллары сакланып кала.
Пост вакыты: 25-2022 ноябрь