増幅反応を成功させるには、各反応成分が各調製物において適切な濃度で存在することが不可欠です。さらに、コンタミネーションが発生しないことも重要です。
特に多数の反応を準備する必要がある場合、各試薬を各容器に個別にピペッティングするのではなく、いわゆるマスターミックスを調製することが確立されています。サンプル固有の成分（プライマー）と水のみが添加された、あらかじめ調製されたミックスが市販されています。あるいは、マスターミックスを自分で調製することも可能です。どちらの場合も、テンプレートを使用せずにミックスを各PCR容器に分配し、最後に個々のDNAサンプルを個別に添加します。
マスターミックスの使用にはいくつかの利点があります。まず、ピペッティングのステップ数が減ります。これにより、ピペッティング中のユーザーエラーのリスクとコンタミネーションのリスクが最小限に抑えられ、もちろん時間も節約できます。原理的には、分注量が多いため、ピペッティング精度も向上します。これは、ピペットの技術データを確認すると容易に理解できます。分注量が少ないほど、偏差が大きくなる可能性があります。すべての調製が同じ容器から行われるという事実は、均一性にプラスの効果をもたらします（十分に混合されている場合）。これにより、実験の再現性も向上します。
マスターミックスを調製する際は、少なくとも10%の余分に量を追加する必要があります（例えば、10回の調製が必要な場合は、11回分として計算します）。これにより、最後の容器まで適切に充填されます。これにより、（わずかな）ピペッティングの誤差や、界面活性剤を含む溶液を投与する際のサンプル損失の影響を補正できます。界面活性剤は、ポリメラーゼなどの酵素溶液やマスターミックスに含まれているため、通常の容器の内面に泡立ちや残留物が発生します。ピペットチップ.
用途と分注する液体の種類に応じて、正しいピペッティング技術（1）を選択し、適切な機器を選択する必要があります。洗剤を含む溶液の場合は、エアクッションピペットの代わりに、直接置換システムまたはいわゆる「低保持」ピペットチップの使用が推奨されます。エースピペットチップ非常に疎水性の高い表面を採用しています。洗剤を含む液体は内側と外側に残留膜を残さないため、溶液の損失を最小限に抑えることができます。
すべての成分を正確に計量することに加え、調製液の汚染を防止することも重要です。高純度の消耗品を使用するだけでは不十分です。エアクッションピペットでは、ピペッティングプロセスによってエアロゾルが発生し、ピペット内に残留する可能性があります。エアロゾルに含まれる可能性のあるDNAは、次のピペッティングステップでサンプル間を移動し、汚染につながる可能性があります。前述の直接置換システムは、このリスクを最小限に抑える可能性もあります。エアクッションピペットでは、飛沫、エアロゾル、生体分子を捕捉してピペットコーンを保護するために、フィルターチップの使用が理にかなっています。
投稿日時: 2022年12月6日