પીસીઆર મિશ્રણને પાઇપિંગ કરતી વખતે શું ધ્યાનમાં લેવું જોઈએ?

સફળ પ્રવર્ધન પ્રતિક્રિયાઓ માટે, દરેક તૈયારીમાં વ્યક્તિગત પ્રતિક્રિયા ઘટકો યોગ્ય સાંદ્રતામાં હાજર હોવા જરૂરી છે. વધુમાં, એ પણ મહત્વપૂર્ણ છે કે કોઈ દૂષણ ન થાય.

ખાસ કરીને જ્યારે ઘણી પ્રતિક્રિયાઓ સેટ-અપ કરવાની હોય છે, ત્યારે દરેક રીએજન્ટને દરેક વાસણમાં અલગથી પાઇપિંગ કરવાને બદલે કહેવાતા માસ્ટર મિક્સ તૈયાર કરવાની સ્થાપના કરવામાં આવી છે. પૂર્વ-રૂપરેખાંકિત મિશ્રણો વ્યાપારી રીતે ઉપલબ્ધ છે, જેમાં ફક્ત નમૂના-વિશિષ્ટ ઘટકો (પ્રાઇમર) અને પાણી ઉમેરવામાં આવે છે. વૈકલ્પિક રીતે, માસ્ટર મિક્સ જાતે તૈયાર કરી શકાય છે. બંને પ્રકારોમાં, મિશ્રણ દરેક પીસીઆર વાસણમાં ટેમ્પ્લેટ વિના વિતરિત કરવામાં આવે છે અને અંતે વ્યક્તિગત ડીએનએ નમૂના અલગથી ઉમેરવામાં આવે છે.

માસ્ટર મિક્સનો ઉપયોગ કરવાના ઘણા ફાયદા છે: પ્રથમ, સિંગલ પાઇપેટિંગ સ્ટેપ્સની સંખ્યા ઓછી થાય છે. આ રીતે, પાઇપેટિંગ દરમિયાન વપરાશકર્તાની ભૂલોનું જોખમ અને દૂષણનું જોખમ બંને ઓછું થાય છે અને, અલબત્ત, સમય બચાવે છે. સૈદ્ધાંતિક રીતે, પાઇપેટિંગની ચોકસાઈ પણ વધારે છે, કારણ કે મોટા વોલ્યુમ ડોઝ કરવામાં આવે છે. પાઇપેટ્સનો ટેકનિકલ ડેટા તપાસતી વખતે આ સમજવું સરળ છે: ડોઝ કરેલ વોલ્યુમ જેટલું નાનું હશે, તેટલું વધારે વિચલનો હોઈ શકે છે. બધી તૈયારીઓ એક જ વાસણમાંથી આવે છે તે હકીકત એકરૂપતા પર હકારાત્મક અસર કરે છે (જો સારી રીતે મિશ્રિત હોય તો). આ પ્રયોગોની પ્રજનનક્ષમતામાં પણ સુધારો કરે છે.

માસ્ટર મિક્સ તૈયાર કરતી વખતે, ઓછામાં ઓછું 10% વધારાનું વોલ્યુમ ઉમેરવું જોઈએ (દા.ત. જો 10 તૈયારીઓ જરૂરી હોય, તો 11 ના આધારે ગણતરી કરો), જેથી છેલ્લું વાસણ પણ યોગ્ય રીતે ભરાય. આ રીતે, (થોડી) પાઇપેટિંગ અચોક્કસતાઓ, અને ડિટર્જન્ટ ધરાવતા દ્રાવણોની માત્રા લેતી વખતે નમૂનાના નુકસાનની અસરને સરભર કરી શકાય છે. ડિટર્જન્ટ પોલિમરેઝ અને માસ્ટર મિક્સ જેવા એન્ઝાઇમ દ્રાવણમાં સમાયેલ છે, જેના કારણે ફીણની રચના થાય છે અને સામાન્ય સપાટી પર અવશેષો રહે છે.પાઇપેટ ટીપ્સ.

ઉપયોગ અને વિતરિત કરવાના પ્રવાહીના પ્રકાર પર આધાર રાખીને, યોગ્ય પાઇપિંગ તકનીક (1) પસંદ કરવી જોઈએ અને યોગ્ય સાધનો પસંદ કરવા જોઈએ. ડિટર્જન્ટ ધરાવતા ઉકેલો માટે, એર-કુશન પાઇપેટ્સના વિકલ્પ તરીકે ડાયરેક્ટ ડિસ્પ્લેસમેન્ટ સિસ્ટમ અથવા કહેવાતા "લો રીટેન્શન" પાઇપેટ ટીપ્સની ભલામણ કરવામાં આવે છે. ની અસરACE PIPETTE ટિપખાસ કરીને હાઇડ્રોફોબિક સપાટી પર આધારિત છે. ડિટર્જન્ટ ધરાવતા પ્રવાહી અંદર અને બહાર અવશેષ ફિલ્મ છોડતા નથી, જેથી દ્રાવણનું નુકસાન ઓછું કરી શકાય.

બધા ઘટકોના ચોક્કસ ડોઝ ઉપરાંત, એ પણ મહત્વપૂર્ણ છે કે તૈયારીઓમાં કોઈ દૂષણ ન થાય. ઉચ્ચ શુદ્ધતાના ઉપભોક્તા પદાર્થોનો ઉપયોગ કરવો પૂરતો નથી, કારણ કે એર કુશન પીપેટમાં પાઇપિંગ પ્રક્રિયા એરોસોલ્સ ઉત્પન્ન કરી શકે છે જે પીપેટમાં રહે છે. એરોસોલમાં સમાવિષ્ટ ડીએનએ નીચેના પીપેટિંગ પગલામાં એક નમૂનામાંથી બીજા નમૂનામાં સ્થાનાંતરિત થઈ શકે છે અને આમ દૂષણ તરફ દોરી જાય છે. ઉપર જણાવેલ ડાયરેક્ટ ડિસ્પ્લેસમેન્ટ સિસ્ટમ્સ પણ આ જોખમ ઘટાડી શકે છે. એર-કુશન પીપેટ્સ માટે સ્પ્લેશ, એરોસોલ્સ અને બાયોમોલેક્યુલ્સ જાળવી રાખીને પીપેટ શંકુને સુરક્ષિત રાખવા માટે ફિલ્ટર ટીપ્સનો ઉપયોગ કરવો અર્થપૂર્ણ છે.