Anplifikazio-erreakzio arrakastatsuak lortzeko, beharrezkoa da erreakzio-osagai indibidualak kontzentrazio egokian egotea prestaketa bakoitzean. Gainera, garrantzitsua da kutsadurarik ez gertatzea.
Batez ere erreakzio asko konfiguratu behar direnean, erreaktibo bakoitza ontzi bakoitzean banan-banan pipetaz sartu beharrean, master nahasketa deritzon bat prestatzea ezarri da. Aurrez konfiguratutako nahasketak daude merkatuan, eta horietan laginaren osagai espezifikoak (primerra) eta ura bakarrik gehitzen dira. Bestela, master nahasketa zuk zeuk prestatu dezakezu. Bi aldaeretan, nahasketa PCR ontzi bakoitzera banatzen da txantiloirik gabe eta DNA lagin bakoitza banan-banan gehitzen da amaieran.
Master nahasketa bat erabiltzeak hainbat abantaila ditu: Lehenik eta behin, pipetatze-urrats kopurua murrizten da. Horrela, pipetatzean erabiltzaileak akatsak izateko arriskua eta kutsadura arriskua minimizatzen dira eta, noski, denbora aurrezten da. Printzipioz, pipetatzearen zehaztasuna ere handiagoa da, bolumen handiagoak dosifikatzen baitira. Hori erraz ulertzen da pipeten datu teknikoak egiaztatzean: Zenbat eta txikiagoa izan dosifikatutako bolumena, orduan eta handiagoak izan daitezke desbideratzeak. Prestaketa guztiak ontzi beretik datozela egitateak eragin positiboa du homogeneotasunean (ondo nahastuta badaude). Horrek esperimentuen erreproduzigarritasuna ere hobetzen du.
Master nahasketa prestatzerakoan, gutxienez % 10eko bolumen gehigarria gehitu behar da (adibidez, 10 prestaketa behar badira, 11ren arabera kalkulatu), azken ontzia ere behar bezala bete dadin. Horrela, pipetatzean (txikiak diren) zehaztasun faltak eta detergenteak dituzten soluzioak dosifikatzean laginaren galeraren eragina konpentsatu daitezke. Detergenteak entzima-soluzioetan, hala nola polimerasetan eta master nahasketan, aparra eratzea eta hondakinak sortzea eragiten dute normalaren barneko gainazalean.pipeta puntak.
Aplikazioaren eta banatu beharreko likido motaren arabera, pipetatzeko teknika zuzena (1) aukeratu eta ekipamendu egokia hautatu behar da. Detergenteak dituzten soluzioetarako, desplazamendu zuzeneko sistema bat edo "atxikipen baxuko" pipeta puntak gomendatzen dira, aire-kuxin pipeten alternatiba gisa. Honen efektuaACE pipeta puntagainazal hidrofobo berezi batean oinarritzen da. Detergenteak dituzten likidoek ez dute hondakin-filmik uzten barrualdean eta kanpoaldean, eta horrela, disoluzioaren galera minimizatu daiteke.
Osagai guztien dosifikazio zehatza ezartzeaz gain, garrantzitsua da prestakinak ez kutsatzea. Ez da nahikoa purutasun handiko kontsumigarriak erabiltzea, aire-kuxindun pipeta batean pipetatzeko prozesuak pipetaren barruan geratzen diren aerosolak sor ditzakeelako. Aerosolean egon daitekeen DNA lagin batetik bestera transferitu daiteke hurrengo pipetatze-urratsean eta, beraz, kutsadura eragin dezake. Goian aipatutako desplazamendu zuzeneko sistemek ere arrisku hori minimizatu dezakete. Aire-kuxindun pipetetarako, zentzuzkoa da iragazki-puntak erabiltzea pipetaren konoa babesteko, zipriztinak, aerosolak eta biomolekulak atxikiz.
Argitaratze data: 2022ko abenduak 6