Por sukcesaj amplifikaj reakcioj, necesas, ke la individuaj reakciaj komponantoj ĉeestu en la ĝusta koncentriĝo en ĉiu preparo. Krome, gravas, ke neniu poluado okazu.
Precipe kiam multaj reakcioj devas esti aranĝitaj, oni establis prepari tiel nomatan majstran miksaĵon anstataŭ pipeti ĉiun reakciilon aparte en ĉiun ujon. Antaŭkonfiguritaj miksaĵoj estas komerce haveblaj, en kiuj nur specimen-specifaj komponantoj (enkondukilo) kaj akvo estas aldonitaj. Alternative, la majstra miksaĵo povas esti preparita mem. En ambaŭ variaĵoj, la miksaĵo estas distribuita al ĉiu PCR-ujo sen ŝablono kaj la individua DNA-specimeno estas aldonita aparte ĉe la fino.
Uzi majstran miksaĵon havas plurajn avantaĝojn: Unue, la nombro da unuopaj pipetadaj paŝoj estas reduktita. Tiel, kaj la risko de uzanteraroj dum pipetado kaj la risko de poluado estas minimumigitaj kaj, kompreneble, tempo estas ŝparita. Principe, la pipetada precizeco ankaŭ estas pli alta, ĉar pli grandaj volumoj estas dozitaj. Ĉi tio estas facile komprenebla dum kontrolado de la teknikaj datumoj de pipetoj: Ju pli malgranda la dozita volumeno, des pli altaj la devioj povas esti. La fakto, ke ĉiuj preparoj venas el la sama ujo, havas pozitivan efikon sur homogenecon (se bone miksitaj). Ĉi tio ankaŭ plibonigas la reprodukteblecon de la eksperimentoj.
Dum preparado de la majstra miksaĵo, oni aldonu almenaŭ 10% da ekstra volumeno (ekz. se necesas 10 preparoj, kalkulu surbaze de 11), por ke eĉ la lasta ujo pleniĝu ĝuste. Tiel oni povas kompensi (malgrandajn) pipetadajn malprecizaĵojn kaj la efikon de specimenperdo dum dozado de lesivaj solvaĵoj enhavantaj lesivojn. Lesivoj troviĝas en enzimaj solvaĵoj kiel polimerazoj kaj majstraj miksaĵoj, kaŭzante ŝaŭmformadon kaj restaĵojn sur la interna surfaco de normalaj...pipetaj pintoj.
Depende de la apliko kaj la tipo de likvaĵo, oni elektu la ĝustan pipetadteknikon (1) kaj elektu la taŭgan ekipaĵon. Por solvaĵoj enhavantaj lesivojn, oni rekomendas rektan delokiĝan sistemon aŭ la tiel nomatajn "malalt-retenajn" pipetajn pintojn kiel alternativon al aerkusenaj pipetoj. La efiko deACE PIPETTE-pintobaziĝas sur aparte hidrofoba surfaco. Likvaĵoj enhavantaj lesivojn ne lasas restaĵan filmon interne kaj ekstere, tiel ke la perdo de solvaĵo povas esti minimumigita.
Krom la preciza dozado de ĉiuj komponantoj, gravas ankaŭ, ke ne okazu poluado de la preparoj. Ne sufiĉas uzi konsumeblajn materialojn de alta pureco, ĉar la pipeta procezo en aerkusena pipeto povas produkti aerosolojn, kiuj restas en la pipeto. La DNA, kiu eble troviĝas en la aerosolo, povas esti transdonita de unu specimeno al la sekva en la sekva pipeta paŝo kaj tiel konduki al poluado. La supre menciitaj rektaj delokiĝaj sistemoj ankaŭ povas minimumigi ĉi tiun riskon. Por aerkusenaj pipetoj estas logike uzi filtrilpintojn por protekti la pipetkonuson retenante ŝprucerojn, aerosolojn kaj biomolekulojn.
Afiŝtempo: 6-a de decembro 2022