Ar gyfer adweithiau ymhelaethu llwyddiannus, mae'n angenrheidiol bod cydrannau unigol yr adwaith yn bresennol yn y crynodiad cywir ym mhob paratoad. Yn ogystal, mae'n bwysig nad oes unrhyw halogiad yn digwydd.
Yn enwedig pan fo'n rhaid sefydlu llawer o adweithiau, mae wedi'i sefydlu i baratoi'r hyn a elwir yn gymysgedd meistr yn lle pipetio pob adweithydd ar wahân i bob llestr. Mae cymysgeddau wedi'u ffurfweddu ymlaen llaw ar gael yn fasnachol, lle dim ond cydrannau penodol i'r sampl (primer) a dŵr sy'n cael eu hychwanegu. Fel arall, gellir paratoi'r cymysgedd meistr eich hun. Yn y ddau amrywiad, mae'r cymysgedd yn cael ei ddosbarthu i bob llestr PCR heb dempled ac mae'r sampl DNA unigol yn cael ei hychwanegu ar wahân ar y diwedd.
Mae gan ddefnyddio cymysgedd meistr sawl mantais: Yn gyntaf, mae nifer y camau pipetio sengl yn cael ei leihau. Yn y modd hwn, mae'r risg o wallau defnyddwyr wrth bibetio a'r risg o halogiad yn cael eu lleihau i'r lleiaf ac, wrth gwrs, mae amser yn cael ei arbed. Mewn egwyddor, mae cywirdeb y pipetio hefyd yn uwch, gan fod cyfrolau mwy yn cael eu dosio. Mae hyn yn hawdd ei ddeall wrth wirio data technegol pipetau: Po leiaf yw'r gyfrol a ddosir, yr uchaf y gall y gwyriadau fod. Mae'r ffaith bod yr holl baratoadau'n dod o'r un llestr yn cael effaith gadarnhaol ar homogenedd (os yw wedi'i gymysgu'n dda). Mae hyn hefyd yn gwella atgynhyrchadwyedd yr arbrofion.
Wrth baratoi'r cymysgedd meistr, dylid ychwanegu o leiaf 10% o gyfaint ychwanegol (e.e. os oes angen 10 paratoad, cyfrifwch ar sail 11), fel bod hyd yn oed y llestr olaf yn llenwi'n iawn. Yn y modd hwn, gellir gwneud iawn am anghywirdebau pipetio (bach), ac effaith colli sampl wrth ddosio toddiannau sy'n cynnwys glanedydd. Mae glanedyddion wedi'u cynnwys mewn toddiannau ensymau fel polymerasau a chymysgeddau meistr, gan achosi ffurfio ewyn a gweddillion ar wyneb mewnol y cymysgedd arferol.awgrymiadau piped.
Gan ddibynnu ar y cymhwysiad a'r math o hylif i'w ddosbarthu, dylid dewis y dechneg pipetio gywir (1) a dewis yr offer priodol. Ar gyfer toddiannau sy'n cynnwys glanedyddion, argymhellir system dadleoli uniongyrchol neu'r hyn a elwir yn bennau piped "cadwad isel" fel dewis arall yn lle pipedau clustog aer. EffaithBlaen PIPET ACEyn seiliedig ar arwyneb hydroffobig arbennig. Nid yw hylifau sy'n cynnwys glanedyddion yn gadael ffilm gweddillion ar y tu mewn a'r tu allan, fel y gellir lleihau colli hydoddiant.
Yn ogystal â dosio union yr holl gydrannau, mae hefyd yn bwysig nad yw'r paratoadau'n cael eu halogi. Nid yw'n ddigon defnyddio nwyddau traul o burdeb uchel, oherwydd gall y broses bibedu mewn piped clustog aer gynhyrchu aerosolau sy'n aros yn y piped. Gellir trosglwyddo'r DNA a all fod yn yr aerosol o un sampl i'r llall yn y cam pipedu canlynol ac felly arwain at halogiad. Gall y systemau dadleoli uniongyrchol a grybwyllir uchod hefyd leihau'r risg hon. Ar gyfer pipedau clustog aer, mae'n gwneud synnwyr defnyddio pennau hidlo i amddiffyn côn y piped trwy gadw tasgu, aerosolau a biofoleciwlau.
Amser postio: Rhag-06-2022