Vir suksesvolle amplifikasiereaksies is dit nodig dat die individuele reaksiekomponente in die korrekte konsentrasie in elke preparaat teenwoordig is. Daarbenewens is dit belangrik dat geen kontaminasie plaasvind nie.
Veral wanneer baie reaksies opgestel moet word, is dit gevestig om 'n sogenaamde meestermengsel voor te berei in plaas daarvan om elke reagens afsonderlik in elke houer te pipetteer. Voorafgekonfigureerde mengsels is kommersieel beskikbaar, waarin slegs monsterspesifieke komponente (onderlaag) en water bygevoeg word. Alternatiewelik kan die meestermengsel self voorberei word. In beide variante word die mengsel sonder 'n sjabloon na elke PCR-houer versprei en die individuele DNS-monster word aan die einde afsonderlik bygevoeg.
Die gebruik van 'n meestermengsel het verskeie voordele: Eerstens word die aantal enkele pipetteringsstappe verminder. Op hierdie manier word beide die risiko van gebruikersfoute tydens pipettering en die risiko van kontaminasie geminimaliseer en natuurlik word tyd bespaar. In beginsel is die pipetteringsakkuraatheid ook hoër, aangesien groter volumes gedoseer word. Dit is maklik om te verstaan wanneer die tegniese data van pipette nagegaan word: Hoe kleiner die gedoseerde volume, hoe hoër kan die afwykings wees. Die feit dat alle preparate uit dieselfde houer kom, het 'n positiewe effek op homogeniteit (indien goed gemeng). Dit verbeter ook die herhaalbaarheid van die eksperimente.
Wanneer die meestermengsel voorberei word, moet ten minste 10% ekstra volume bygevoeg word (bv. as 10 voorbereidings benodig word, bereken op grond van 11), sodat selfs die laaste houer behoorlik gevul word. Op hierdie manier kan (effense) pipetteringsonakkuraathede, en die effek van monsterverlies by die dosering van skoonmaakmiddelbevattende oplossings, gekompenseer word. Skoonmaakmiddels word in ensiemoplossings soos polimerases en meestermengsels aangetref, wat skuimvorming en residue op die binneste oppervlak van normale ... veroorsaak.pipetpunte.
Afhangende van die toepassing en die tipe vloeistof wat toegedien moet word, moet die korrekte pipettegniek (1) gekies word en die toepaslike toerusting gekies word. Vir oplossings wat skoonmaakmiddels bevat, word 'n direkte verplasingstelsel of die sogenaamde "lae retensie" pipetpunte as 'n alternatief vir lugkussingpipette aanbeveel. Die effek vanACE PIPET-puntis gebaseer op 'n besonder hidrofobiese oppervlak. Vloeistowwe wat skoonmaakmiddels bevat, laat nie 'n residufilm aan die binne- en buitekant agter nie, sodat die verlies van oplossing tot die minimum beperk kan word.
Behalwe vir die presiese dosering van alle komponente, is dit ook belangrik dat geen kontaminasie van die preparate plaasvind nie. Dit is nie voldoende om verbruikbare produkte van hoë suiwerheid te gebruik nie, want die pipetteringsproses in 'n lugkussingpipet kan aërosols produseer wat in die pipet agterbly. Die DNS wat in die aërosol mag wees, kan in die volgende pipetteringsstap van een monster na die volgende oorgedra word en dus tot kontaminasie lei. Die direkte verplasingstelsels wat hierbo genoem word, kan ook hierdie risiko verminder. Vir lugkussingpipette maak dit sin om filterpunte te gebruik om die pipetkeël te beskerm deur spatsels, aërosols en biomolekules terug te hou.
Plasingstyd: 6 Desember 2022