Si të pipetohen vëllime të vogla me pipeta manuale të dorës

Ndërsa po i kushtohet më shumë vëmendje uljes së reagentëve dhe kostove, vëllimet më të vogla janë në kërkesë të lartë, p.sh., për përgatitjen e PCR Mastermix ose reaksioneve enzimatike. Por pipetimi i vëllimeve të vogla nga 0.2 – 5 µL paraqet sfida të reja për saktësinë dhe precizitetin e pipetimit. Pikat e mëposhtme janë thelbësore:

1. Madhësia e pipetës dhe e majës: Zgjidhni gjithmonë pipetën me vëllimin nominal më të ulët të mundshëm dhe majën më të vogël për ta mbajtur jastëkun e ajrit sa më të vogël të jetë e mundur. Kur pipetoni 1 µL p.sh., zgjidhni një pipetë 0.25 – 2.5 µL dhe majë përkatëse në vend të një pipete 1 – 10 µL.
2. Kalibrimi dhe mirëmbajtja: Është thelbësore që pipetat tuaja të kalibrohen dhe mirëmbahen siç duhet. Rregullimet e vogla dhe pjesët e thyera në një pipetë çojnë në një rritje masive të vlerave të gabimeve sistematike dhe të rastësishme. Një kalibrim sipas ISO 8655 duhet të kryhet një herë në vit.
3. Pipeta me zhvendosje pozitive: Kontrolloni nëse keni një pipetë me zhvendosje pozitive me një gamë të ulët vëllimi në laboratorin tuaj. Në përgjithësi, përdorimi i këtij lloji pipete çon në një rezultat më të mirë të pipetimit për sa i përket saktësisë dhe precizitetit sesa me pipetat klasike me jastëk ajri.
4. Mundohuni të përdorni vëllime më të mëdha: Mund të merrni në konsideratë hollimin e mostrës suaj për të pipetuar vëllime më të mëdha me të njëjtën sasi në reaksionin përfundimtar. Kjo mund të zvogëlojë gabimet e pipetimit me vëllime shumë të vogla të mostrës.

Përveç një mjeti të mirë, studiuesi duhet të ketë një teknikë shumë të mirë të pipetimit. Kushtojini vëmendje të veçantë hapave të mëposhtëm:

1. Lidhja e majës: Mos e ngjesh pipetën në majë, pasi kjo mund të dëmtojë skajin e hollë të majës, të shkaktojë ridrejtimin e rrezes së lëngut ose të dëmtojë grykën. Ushtroni vetëm presion të lehtë kur lidhni një majë dhe përdorni një pipetë me majë konike me sustë.
2. Mbajtja e pipetës: Mos e mbani pipetën në dorë ndërsa prisni centrifugën, ciklizuesin etj. Pjesa e brendshme e pipetës do të nxehet dhe do të çojë në zgjerimin e jastëkut të ajrit, duke rezultuar në devijime nga vëllimi i caktuar gjatë pipetimit.
3. Para-lagitje: Lagështimi i ajrit brenda majës dhe pipetës e përgatit majën për mostrën dhe shmang avullimin gjatë aspirimit të vëllimit të transferimit.
4. Aspirimi vertikal: Kjo është shumë e rëndësishme kur trajtohen vëllime të vogla për të shmangur efektin kapilar që ndodh kur pipeta mbahet në një kënd.
5. Thellësia e zhytjes: Zhytni majën sa më pak të jetë e mundur për të parandaluar hyrjen e lëngut në majë për shkak të efektit kapilar. Rregull praktik: Sa më e vogël të jetë maja dhe vëllimi, aq më e ulët është thellësia e zhytjes. Ne rekomandojmë një maksimum prej 2 mm kur pipetohen vëllime të vogla.
6. Shpërndarja në kënd 45°: Rrjedhja optimale e lëngut garantohet kur pipeta mbahet në një kënd 45°.
7. Kontakti me murin e enës ose sipërfaqen e lëngut: Vëllime të vogla mund të shpërndahen siç duhet vetëm kur maja mbahet në murin e enës ose zhytet në lëng. Edhe pika e fundit nga maja mund të shpërndahet me saktësi.
8. Shfryrje: Një shfryrje është e detyrueshme pas shpërndarjes së vëllimeve të vogla për të shpërndarë edhe pikën e fundit të lëngut që ndodhet në majë. Shfryrja duhet të kryhet edhe kundër murit të enës. Kini kujdes që të mos sillni flluska ajri në mostër kur kryeni një shfryrje në sipërfaqen e lëngut.