0,2 ile 5 µL arasındaki hacimleri pipetlerken pipetleme doğruluğu ve hassasiyeti son derece önemlidir, çünkü küçük hacimlerde kullanım hataları daha belirgin olduğundan iyi bir pipetleme tekniği şarttır.
Reaktiflerin ve maliyetlerin azaltılmasına daha fazla odaklanıldıkça, örneğin PCR Mastermix'in veya enzim reaksiyonlarının hazırlanması için daha küçük hacimler yüksek talep görmektedir.Ancak 0,2 – 5 µL arası küçük hacimlerin pipetlenmesi, pipetleme doğruluğu ve hassasiyeti açısından yeni zorluklar ortaya çıkarır.Aşağıdaki noktalar önemlidir:
- Pipet ve uç boyutu: Hava yastığını mümkün olduğu kadar küçük tutmak için daima mümkün olan en düşük nominal hacme ve en küçük uca sahip pipeti seçin.Örneğin 1 µL pipetleme yaparken, 1 – 10 µL pipet yerine 0,25 – 2,5 µL pipet ve eşleşen ucu seçin.
- Kalibrasyon ve bakım: Pipetlerinizin uygun şekilde kalibre edilmesi ve bakımının yapılması önemlidir.Pipet üzerinde yapılan küçük ayarlamalar ve kırık parçalar, sistematik ve rastgele hata değerlerinde büyük artışa neden olur.ISO 8655'e göre kalibrasyon yılda bir kez yapılmalıdır.
- Pozitif deplasmanlı pipetler: Laboratuvarınızda düşük hacim aralığına sahip pozitif deplasmanlı pipetinizin olup olmadığını kontrol edin.Genel olarak bu tür pipetlerin kullanılması, doğruluk ve hassasiyet açısından klasik hava yastıklı pipetlere göre daha iyi bir pipetleme sonucuna yol açar.
- Daha büyük hacimler kullanmayı deneyin: Nihai reaksiyonda numunenizi aynı miktarla daha büyük hacimleri pipetlemek için seyreltmeyi düşünebilirsiniz.Bu, çok küçük numune hacimlerinde pipetleme hatalarını azaltabilir.
İyi bir araca ek olarak araştırmacının çok iyi bir pipetleme tekniğine sahip olması gerekir.Aşağıdaki adımlara özellikle dikkat edin:
- Ucun takılması: Pipeti uca sıkıştırmayın; bu, ince ucun zarar görmesine ve sıvı ışınının yeniden yönlendirilmesine veya deliğin hasar görmesine neden olabilir.Ucu takarken yalnızca hafif bir baskı uygulayın ve yaylı uç konisi olan bir pipet kullanın.
- Pipeti tutma: Santrifüj, döngüleyici vb. için beklerken pipeti elinizde tutmayın. Pipetin içi ısınacak ve hava yastığının genleşmesine yol açarak pipetleme sırasında ayarlanan hacimden sapmalara neden olacaktır.
- Ön ıslatma: Uç ve pipet içindeki havanın nemlendirilmesi, ucu örnek için hazırlar ve transfer hacmi aspire edilirken buharlaşmayı önler.
- Dikey aspirasyon: Pipet belli bir açıyla tutulduğunda oluşan kılcal etkiyi önlemek için küçük hacimler kullanılırken bu çok önemlidir.
- Daldırma derinliği: Kılcal etki nedeniyle sıvının uca girmesini önlemek için ucu mümkün olduğu kadar az daldırın.Temel kural: Uç ve hacim ne kadar küçük olursa, daldırma derinliği de o kadar düşük olur.Küçük hacimleri pipetlerken maksimum 2 mm öneririz.
- 45° açıyla dağıtım: Pipet 45° açıyla tutulduğunda sıvının optimum şekilde dışarı akması garanti edilir.
- Damar duvarına veya sıvı yüzeyine temas: Küçük hacimler yalnızca uç damar duvarına doğru tutulduğunda veya sıvıya daldırıldığında uygun şekilde dağıtılabilir.Uçtan gelen son damla bile doğru şekilde dağıtılabilir.
- Üfleme: Düşük hacimler dağıtıldıktan sonra, uçta bulunan sıvının son damlasını bile dağıtmak için üfleme zorunludur.Üfleme işlemi aynı zamanda hazne duvarına karşı da gerçekleştirilmelidir.Sıvı yüzeyine üfleme yaparken numunenin içine hava kabarcıkları girmemesine dikkat edin.
Gönderim zamanı: Şubat-18-2021