جب 0.2 سے 5 µL تک والیوم پائپنگ کرتے ہیں تو پائپنگ کی درستگی اور درستگی انتہائی اہمیت کی حامل ہوتی ہے ایک اچھی پائپٹنگ تکنیک ضروری ہے کیونکہ چھوٹے حجم کے ساتھ ہینڈلنگ کی غلطیاں زیادہ واضح ہوتی ہیں۔
چونکہ ری ایجنٹس اور اخراجات کو کم کرنے پر زیادہ توجہ دی جا رہی ہے، چھوٹے حجم کی زیادہ مانگ ہے، مثلاً PCR ماسٹر مکس یا انزائم ری ایکشن کی تیاری کے لیے۔لیکن 0.2 - 5 µL سے چھوٹے حجم کو پائپ لگانا پائپنگ کی درستگی اور درستگی کے لیے نئے چیلنجز کا تعین کرتا ہے۔درج ذیل نکات ضروری ہیں:
- پپیٹ اور نوک کا سائز: ہمیشہ ممکن حد تک کم سے کم برائے نام حجم کے ساتھ پائپیٹ کا انتخاب کریں اور ایئر کشن کو ہر ممکن حد تک چھوٹا رکھنے کے لیے سب سے چھوٹی نوک کا انتخاب کریں۔مثال کے طور پر 1 µL پائپٹنگ کرتے وقت، 1 - 10 µL پائپیٹ کے بجائے 0.25 – 2.5 µL پائپیٹ اور مماثل ٹپ کا انتخاب کریں۔
- انشانکن اور دیکھ بھال: یہ ضروری ہے کہ آپ کے پائپٹس کو مناسب طریقے سے کیلیبریٹ کیا جائے اور ان کی دیکھ بھال کی جائے۔پائپیٹ پر چھوٹی ایڈجسٹمنٹ اور ٹوٹے ہوئے حصے منظم اور بے ترتیب غلطی کی اقدار میں بڑے پیمانے پر اضافے کا باعث بنتے ہیں۔ISO 8655 کے مطابق ایک انشانکن سال میں ایک بار کرنا ضروری ہے۔
- مثبت نقل مکانی پائپیٹ: چیک کریں کہ آیا آپ کے پاس آپ کی لیب میں کم حجم کی حد کے ساتھ مثبت نقل مکانی پائپیٹ ہے۔عام طور پر، اس قسم کے پائپیٹ کا استعمال کلاسک ایئر کشن پائپیٹس کے مقابلے میں درستگی اور درستگی کے لحاظ سے بہتر پائپٹنگ نتیجہ کی طرف لے جاتا ہے۔
- بڑی مقداریں استعمال کرنے کی کوشش کریں: آپ حتمی ردعمل میں اسی مقدار کے ساتھ بڑے حجم کو پپیٹ کرنے کے لیے اپنے نمونے کو کم کرنے پر غور کر سکتے ہیں۔یہ بہت چھوٹے نمونے والیوم کے ساتھ پائپٹنگ کی غلطیوں کو کم کر سکتا ہے۔
ایک اچھے آلے کے علاوہ، محقق کے پاس پائپٹنگ کی بہت اچھی تکنیک ہونی چاہیے۔مندرجہ ذیل اقدامات پر خصوصی توجہ دیں:
- ٹپ اٹیچمنٹ: پپیٹ کو نوک پر جام نہ کریں کیونکہ اس سے ٹپ کے باریک سرے کو نقصان پہنچ سکتا ہے جس کی وجہ سے مائع بیم کو ری ڈائریکٹ کیا جا سکتا ہے یا سوراخ کو نقصان پہنچ سکتا ہے۔ٹپ کو منسلک کرتے وقت صرف ہلکا دباؤ لگائیں اور اسپرنگ سے بھری ہوئی ٹپ کون کے ساتھ پائپیٹ استعمال کریں۔
- پپیٹ کو پکڑنا: سینٹری فیوج، سائکلر وغیرہ کا انتظار کرتے ہوئے اپنے ہاتھ میں پپیٹ نہ رکھیں۔ پپیٹ کے اندر کا حصہ گرم ہو جائے گا اور ہوا کے کشن کو پھیلانے کی طرف لے جائے گا جس کے نتیجے میں پائپٹنگ کرتے وقت سیٹ والیوم سے انحراف ہو گا۔
- پری گیلا ہونا: ٹپ اور پپیٹ کے اندر ہوا کی نمی نمونے کے لیے ٹپ تیار کرتی ہے اور منتقلی کے حجم کی خواہش کرتے وقت بخارات سے بچ جاتی ہے۔
- عمودی خواہش: یہ بہت اہم ہے جب چھوٹے حجم کو سنبھالتے ہوئے کیپلیری اثر سے بچنے کے لیے جو پائپیٹ کو زاویہ پر رکھا جاتا ہے۔
- وسرجن کی گہرائی: کیپلیری اثر کی وجہ سے مائع کو ٹپ میں داخل ہونے سے روکنے کے لیے ٹپ کو جتنا کم ہو سکے ڈوبیں۔انگوٹھے کا اصول: ٹپ اور حجم جتنا چھوٹا ہوگا، وسرجن کی گہرائی اتنی ہی کم ہوگی۔چھوٹے حجم کو پائپ کرتے وقت ہم زیادہ سے زیادہ 2 ملی میٹر کی تجویز کرتے ہیں۔
- 45° زاویہ پر تقسیم کرنا: جب پائپیٹ کو 45° زاویہ پر رکھا جاتا ہے تو مائع کے زیادہ سے زیادہ بہاؤ کی ضمانت دی جاتی ہے۔
- برتن کی دیوار یا مائع کی سطح سے رابطہ: چھوٹے حجم صرف اس وقت مناسب طریقے سے تقسیم کیے جاسکتے ہیں جب برتن کی دیوار کے ساتھ نوک کو پکڑا جاتا ہے، یا مائع میں ڈوبا جاتا ہے۔یہاں تک کہ ٹپ سے آخری قطرہ بھی درست طریقے سے تقسیم کیا جاسکتا ہے۔
- بلو آؤٹ: ٹپ میں موجود مائع کے آخری قطرے کو بھی ڈسپینس کرنے کے لیے کم حجم دینے کے بعد بلو آؤٹ لازمی ہے۔بلو آؤٹ برتن کی دیوار کے خلاف بھی کیا جانا چاہئے۔ہوشیار رہیں کہ مائع سطح پر بلو آؤٹ کرتے وقت ہوا کے بلبلوں کو نمونے میں نہ لائیں۔
پوسٹ ٹائم: فروری 18-2021