जब पिपेटिंग वॉल्यूम 0.2 से 5 μL तक होता है, तो पिपेटिंग सटीकता और परिशुद्धता अत्यंत महत्वपूर्ण होती है, एक अच्छी पिपेटिंग तकनीक आवश्यक होती है क्योंकि छोटे वॉल्यूम के साथ हैंडलिंग गलतियाँ अधिक स्पष्ट होती हैं।
चूंकि अभिकर्मकों और लागत को कम करने पर अधिक ध्यान दिया जा रहा है, इसलिए छोटी मात्रा की मांग अधिक है, उदाहरण के लिए, पीसीआर मास्टरमिक्स या एंजाइम प्रतिक्रियाओं की तैयारी के लिए।लेकिन 0.2 - 5 μL से छोटी मात्रा में पाइपिंग करने से पाइपिंग सटीकता और परिशुद्धता के लिए नई चुनौतियाँ सामने आती हैं।निम्नलिखित बिंदु आवश्यक हैं:
- पिपेट और टिप का आकार: एयर कुशन को यथासंभव छोटा रखने के लिए हमेशा सबसे कम नाममात्र मात्रा और सबसे छोटी टिप वाले पिपेट का चयन करें।उदाहरण के लिए, 1 µL पिपेट करते समय, 1 - 10 µL पिपेट के बजाय 0.25 - 2.5 µL पिपेट और मैचिंग टिप चुनें।
- अंशांकन और रखरखाव: यह आवश्यक है कि आपके पिपेट ठीक से अंशांकित और रखरखाव किए जाएं।पिपेट पर छोटे समायोजन और टूटे हुए हिस्से व्यवस्थित और यादृच्छिक त्रुटि मूल्यों में भारी वृद्धि का कारण बनते हैं।आईएसओ 8655 के अनुसार अंशांकन वर्ष में एक बार अवश्य किया जाना चाहिए।
- सकारात्मक विस्थापन पिपेट: जांचें कि क्या आपकी प्रयोगशाला में कम मात्रा सीमा वाला सकारात्मक विस्थापन पिपेट है।सामान्य तौर पर, इस प्रकार के पिपेट का उपयोग करने से क्लासिक एयर-कुशन पिपेट की तुलना में सटीकता और परिशुद्धता के मामले में बेहतर पिपेटिंग परिणाम प्राप्त होता है।
- बड़ी मात्रा में उपयोग करने का प्रयास करें: आप अंतिम प्रतिक्रिया में समान मात्रा के साथ बड़ी मात्रा में पिपेट करने के लिए अपने नमूने को पतला करने पर विचार कर सकते हैं।यह बहुत छोटी नमूना मात्रा के साथ पिपेटिंग त्रुटियों को कम कर सकता है।
एक अच्छे उपकरण के अलावा, शोधकर्ता के पास एक बहुत अच्छी पिपेटिंग तकनीक भी होनी चाहिए।निम्नलिखित चरणों पर विशेष ध्यान दें:
- टिप अटैचमेंट: टिप पर पिपेट को जाम न करें क्योंकि इससे टिप के बारीक सिरे को नुकसान हो सकता है, जिससे तरल किरण पुनर्निर्देशित हो सकती है या छिद्र को नुकसान हो सकता है।टिप जोड़ते समय केवल हल्का दबाव डालें और स्प्रिंग-लोडेड टिप कोन वाले पिपेट का उपयोग करें।
- पिपेट को पकड़ना: सेंट्रीफ्यूज, साइक्लर आदि की प्रतीक्षा करते समय पिपेट को अपने हाथ में न रखें। पिपेट के अंदर का हिस्सा गर्म हो जाएगा और एयर कुशन का विस्तार करेगा जिसके परिणामस्वरूप पिपेट करते समय निर्धारित मात्रा से विचलन होगा।
- पूर्व-गीला करना: टिप और पिपेट के अंदर हवा का आर्द्रीकरण नमूने के लिए टिप तैयार करता है और स्थानांतरण मात्रा की आकांक्षा करते समय वाष्पीकरण से बचाता है।
- ऊर्ध्वाधर आकांक्षा: पिपेट को एक कोण पर रखने पर होने वाले केशिका प्रभाव से बचने के लिए छोटी मात्रा को संभालते समय यह बहुत महत्वपूर्ण है।
- विसर्जन की गहराई: केशिका प्रभाव के कारण तरल को टिप में प्रवेश करने से रोकने के लिए टिप को जितना संभव हो उतना कम डुबोएं।अंगूठे का नियम: टिप और आयतन जितना छोटा होगा, विसर्जन की गहराई उतनी ही कम होगी।छोटी मात्रा में पाइपिंग करते समय हम अधिकतम 2 मिमी की अनुशंसा करते हैं।
- 45° कोण पर वितरण: जब पिपेट को 45° कोण पर रखा जाता है तो तरल के इष्टतम प्रवाह की गारंटी होती है।
- बर्तन की दीवार या तरल सतह से संपर्क: छोटी मात्रा केवल तभी ठीक से वितरित की जा सकती है जब टिप को बर्तन की दीवार के खिलाफ रखा जाता है, या तरल में डुबोया जाता है।यहां तक कि टिप से आखिरी बूंद भी सटीकता से निकाली जा सकती है।
- ब्लो-आउट: टिप में मौजूद तरल की आखिरी बूंद को भी निकालने के लिए कम मात्रा में वितरण के बाद ब्लो-आउट अनिवार्य है।पोत की दीवार पर भी ब्लो-आउट किया जाना चाहिए।तरल सतह पर ब्लो-आउट करते समय सावधान रहें कि नमूने में हवा के बुलबुले न आएं।
पोस्ट करने का समय: फरवरी-18-2021