Jak pipetovat malé objemy pomocí ručních ručních pipet

Vzhledem k tomu, že je kladen větší důraz na snižování reagencií a nákladů, jsou velmi žádané menší objemy, např. pro přípravu PCR Mastermix nebo enzymových reakcí.Pipetování malých objemů od 0,2 do 5 µl však představuje nové výzvy pro přesnost a přesnost pipetování.Důležité jsou následující body:

1. Velikost pipety a špičky: Vždy vybírejte pipetu s co nejnižším jmenovitým objemem a nejmenší špičkou, aby byl vzduchový polštářek co nejmenší.Při pipetování např. 1 µL zvolte raději 0,25 – 2,5 µL pipetu a odpovídající špičku než 1 – 10 µL pipetu.
2. Kalibrace a údržba: Je nezbytné, aby byly vaše pipety správně kalibrovány a udržovány.Malé úpravy a rozbité části na pipetě vedou k masivnímu nárůstu hodnot systematických a náhodných chyb.Kalibrace podle ISO 8655 musí být provedena jednou ročně.
3. Pipety s pozitivním výtlakem: Zkontrolujte, zda ve vaší laboratoři nemáte pipetu s pozitivním výtlakem s nízkým rozsahem objemu.Obecně platí, že použití tohoto typu pipet vede k lepšímu výsledku pipetování z hlediska přesnosti a preciznosti než u klasických pipet se vzduchovým polštářkem.
4. Zkuste použít větší objemy: Můžete zvážit naředění vzorku na pipetování větších objemů se stejným množstvím v konečné reakci.To může snížit chyby při pipetování u velmi malých objemů vzorků.

Kromě dobrého nástroje musí mít výzkumník velmi dobrou techniku ​​pipetování.Věnujte zvláštní pozornost následujícím krokům:

1. Upevnění špičky: Nezasekávejte pipetu na špičce, protože by mohlo dojít k poškození jemného konce špičky a přesměrování paprsku kapaliny nebo poškození ústí.Při nasazování špičky vyvíjejte pouze mírný tlak a používejte pipetu s odpruženým kuželem špičky.
2. Držení pipety: Nedržte pipetu v ruce, když čekáte na centrifugu, cyklovač atd. Vnitřek pipety se zahřeje a způsobí roztažení vzduchového polštáře, což má za následek odchylky od nastaveného objemu při pipetování.
3. Předvlhčení: Zvlhčením vzduchu uvnitř špičky a pipety se špička připraví na vzorek a zabrání se odpařování při nasávání přenášeného objemu.
4. Vertikální aspirace: Toto je velmi důležité při manipulaci s malými objemy, aby se zabránilo kapilárnímu efektu, ke kterému dochází, když je pipeta držena pod úhlem.
5. Hloubka ponoření: Špičku ponořte co nejméně, abyste zabránili vniknutí kapaliny do špičky v důsledku kapilárního efektu.Základní pravidlo: Čím menší je špička a objem, tím menší je hloubka ponoření.Při pipetování malých objemů doporučujeme maximálně 2 mm.
6. Dávkování pod úhlem 45°: Optimální výtok kapaliny je zaručen, když je pipeta držena pod úhlem 45°.
7. Kontakt se stěnou nádoby nebo povrchem kapaliny: Malé objemy lze správně dávkovat pouze tehdy, když je hrot přidržován ke stěně nádoby nebo je ponořen do kapaliny.I poslední kapka ze špičky může být přesně dávkována.
8. Vyfouknutí: Vyfouknutí je povinné po nadávkování malých objemů, aby se vystříkla i poslední kapka kapaliny přítomné ve špičce.Vyfukování by mělo být také provedeno proti stěně nádoby.Při provádění vyfukování na povrch kapaliny dávejte pozor, aby se do vzorku nedostaly vzduchové bubliny.