Cách sử dụng pipet thể tích nhỏ bằng pipet thủ công cầm tay

Khi tập trung nhiều hơn vào việc giảm thuốc thử và chi phí, nhu cầu về khối lượng nhỏ hơn sẽ tăng lên, ví dụ như để chuẩn bị PCR Mastermix hoặc phản ứng enzyme.Tuy nhiên, việc lấy mẫu thể tích nhỏ từ 0,2 – 5 µL đặt ra những thách thức mới về độ chính xác và độ chính xác của việc lấy mẫu bằng pipet.Những điểm sau đây là cần thiết:

1. Kích thước pipet và đầu tip: Luôn chọn pipet có thể tích danh nghĩa thấp nhất có thể và đầu tip nhỏ nhất để giữ cho đệm khí càng nhỏ càng tốt.Ví dụ: khi dùng pipet 1 µL, hãy chọn pipet 0,25 – 2,5 µL và đầu tip phù hợp thay vì pipet 1 – 10 µL.
2. Hiệu chuẩn và bảo trì: Điều quan trọng là pipet của bạn phải được hiệu chuẩn và bảo trì đúng cách.Những điều chỉnh nhỏ và các bộ phận bị hỏng trên pipet dẫn đến sự gia tăng lớn các giá trị lỗi hệ thống và ngẫu nhiên.Việc hiệu chuẩn theo ISO 8655 phải được thực hiện mỗi năm một lần.
3. Pipet dịch chuyển dương: Kiểm tra xem phòng thí nghiệm của bạn có pipet dịch chuyển dương với phạm vi thể tích thấp hay không.Nhìn chung, việc sử dụng loại pipet này mang lại kết quả pipet tốt hơn về độ chính xác và độ chính xác so với pipet đệm khí cổ điển.
4. Cố gắng sử dụng thể tích lớn hơn: Bạn có thể cân nhắc pha loãng mẫu của mình thành thể tích lớn hơn bằng pipet với cùng một lượng trong phản ứng cuối cùng.Điều này có thể làm giảm các lỗi khi sử dụng pipet với lượng mẫu rất nhỏ.

Ngoài một công cụ tốt, người nghiên cứu phải có kỹ thuật pipet thật tốt.Đặc biệt chú ý đến các bước sau:

1. Gắn đầu tip: Không kẹp pipet vào đầu tip vì điều này có thể làm hỏng đầu tip nhỏ khiến chùm chất lỏng bị chuyển hướng hoặc làm hỏng lỗ.Chỉ ấn nhẹ khi gắn đầu tip và sử dụng pipet có đầu côn có lò xo.
2. Cầm pipet: Không cầm pipet trên tay trong khi chờ máy ly tâm, máy quay vòng, v.v. Mặt trong của pipet sẽ nóng lên và khiến đệm khí giãn nở dẫn đến sai lệch so với thể tích đã đặt khi hút pipet.
3. Làm ướt trước: Việc làm ẩm không khí bên trong đầu tip và pipet giúp chuẩn bị đầu tip cho mẫu và tránh bay hơi khi hút thể tích chuyển.
4. Hút theo chiều dọc: Điều này rất quan trọng khi xử lý thể tích nhỏ để tránh hiệu ứng mao dẫn xảy ra khi giữ pipet ở một góc.
5. Độ sâu ngâm: Nhúng đầu bút càng ít càng tốt để ngăn chất lỏng xâm nhập vào đầu do hiệu ứng mao dẫn.Nguyên tắc nhỏ: Đầu và âm lượng càng nhỏ thì độ sâu ngâm càng thấp.Chúng tôi khuyến nghị tối đa là 2 mm khi hút lượng nhỏ.
6. Phân phối ở góc 45°: Dòng chất lỏng chảy ra được đảm bảo tối ưu khi giữ pipet ở góc 45°.
7. Tiếp xúc với thành bình hoặc bề mặt chất lỏng: Một lượng nhỏ chỉ có thể được phân phối đúng cách khi đầu vòi được giữ sát vào thành bình hoặc nhúng vào chất lỏng.Ngay cả giọt cuối cùng từ đầu cũng có thể được phân phối một cách chính xác.
8. Xả hơi: Bắt buộc phải xả hơi sau khi xả với lượng nhỏ để phân phối ngay cả giọt chất lỏng cuối cùng có trong đầu tip.Việc xả hơi cũng nên được thực hiện trên thành bình.Cẩn thận không mang bọt khí vào mẫu khi thực hiện xả hơi trên bề mặt chất lỏng.