Pipetoitaessa 0,2 - 5 µl:n tilavuuksia pipetoinnin tarkkuus ja tarkkuus on äärimmäisen tärkeää, hyvä pipetointitekniikka on välttämätöntä, koska käsittelyvirheet ovat selvempiä pienillä tilavuuksilla.
Koska enemmän huomiota kiinnitetään reagenssien ja kustannusten vähentämiseen, pienemmät määrät ovat suuri kysyntä, esimerkiksi PCR Mastermixin tai entsyymireaktioiden valmistukseen.Mutta pienten 0,2–5 µL:n määrien pipetointi asettaa uusia haasteita pipetoinnin tarkkuudelle.Seuraavat kohdat ovat välttämättömiä:
- Pipetin ja kärjen koko: Valitse aina pienin mahdollinen nimellistilavuus ja pienin kärki pipetti, jotta ilmatyyny pysyy mahdollisimman pienenä.Kun pipetoi esim. 1 µl, valitse 0,25 – 2,5 µl pipetti ja siihen sopiva kärki 1 – 10 µL pipetin sijaan.
- Kalibrointi ja huolto: On tärkeää, että pipettisi kalibroidaan ja huolletaan oikein.Pienet säädöt ja rikkoutuneet osat pipetissä johtavat valtavaan systemaattisten ja satunnaisten virhearvojen kasvuun.ISO 8655 -standardin mukainen kalibrointi on suoritettava kerran vuodessa.
- Positiiviset syrjäytyspipetit: Tarkista, onko laboratoriossasi positiivista syrjäytyspipettiä, jonka tilavuusalue on pieni.Yleensä tämäntyyppisten pipettien käyttö johtaa parempaan pipetointitulokseen tarkkuuden ja tarkkuuden suhteen kuin perinteisillä ilmatyynypipetteillä.
- Yritä käyttää suurempia määriä: Voit harkita näytteen laimentamista pipetoidaksesi suurempia määriä samalla määrällä lopullisessa reaktiossa.Tämä voi vähentää pipetointivirheitä erittäin pienillä näytemäärillä.
Hyvän työkalun lisäksi tutkijalla tulee olla erittäin hyvä pipetointitekniikka.Kiinnitä erityistä huomiota seuraaviin vaiheisiin:
- Kärjen kiinnitys: Älä jumita pipettiä kärkeen, koska se voi vahingoittaa kärjen hienoa päätä ja aiheuttaa nestesäteen suuntaamisen tai vaurioittaa suutinta.Käytä vain kevyttä painetta kiinnittäessäsi kärkeä ja käytä pipettiä, jossa on jousikuormitettu kärkikartio.
- Pipetin piteleminen: Älä pidä pipettiä kädessäsi odottaessasi sentrifugia, syklilaitetta jne. Pipetin sisäpuoli lämpenee ja saa ilmatyynyn laajenemaan, mikä johtaa poikkeamiin asetetusta tilavuudesta pipetoinnin aikana.
- Esikostutus: Kärjen ja pipetin sisällä olevan ilman kostutus valmistelee kärjen näytettä varten ja estää haihtumisen siirtotilavuutta imettäessä.
- Pystysuora aspiraatio: Tämä on erittäin tärkeää käsiteltäessä pieniä määriä, jotta vältetään kapillaarivaikutus, joka ilmenee, kun pipettiä pidetään vinossa.
- Upotussyvyys: Upota kärkeä mahdollisimman vähän estääksesi nesteen pääsyn kärkeen kapillaarivaikutuksen vuoksi.Nyrkkisääntö: Mitä pienempi kärki ja tilavuus, sitä pienempi upotussyvyys.Suosittelemme korkeintaan 2 mm pipetoitaessa pieniä määriä.
- Annostelu 45° kulmassa: Nesteen optimaalinen ulosvirtaus taataan, kun pipettiä pidetään 45° kulmassa.
- Kosketus suonen seinämään tai nesteen pintaan: Pienet määrät voidaan annostella kunnolla vain, kun kärkeä pidetään suonen seinämää vasten tai upotetaan nesteeseen.Viimeinenkin tippa kärjestä voidaan annostella tarkasti.
- Puhallus: Puhallus on pakollinen pienien määrien annostelun jälkeen, jotta kärjessä oleva viimeinenkin nestepisara annostellaan.Puhallus tulee suorittaa myös suonen seinää vasten.Varo, ettet tuo näytteeseen ilmakuplia, kun suoritat ulospuhalluksen nestepinnalla.
Postitusaika: 18.2.2021