Када пипетирате запремине од 0,2 до 5 µЛ, тачност и прецизност пипетирања су од највеће важности, добра техника пипетирања је неопходна јер су грешке при руковању очигледније са малим запреминама.
Како се више пажње ставља на смањење реагенса и трошкова, мање количине су у великој потражњи, на пример, за припрему ПЦР Мастермик-а или ензимске реакције.Али пипетирање малих количина од 0,2 – 5 µЛ поставља нове изазове за тачност и прецизност пипетирања.Следеће тачке су од суштинског значаја:
- Величина пипете и врха: Увек бирајте пипету са најмањом могућом номиналном запремином и најмањим врхом да би ваздушни јастук био што мањи.Када пипетирате 1 µЛ, на пример, изаберите пипету од 0,25 – 2,5 µЛ и одговарајући врх уместо пипете од 1 – 10 µЛ.
- Калибрација и одржавање: Важно је да су ваше пипете правилно калибриране и одржаване.Мала подешавања и поломљени делови на пипети доводе до огромног повећања систематских и случајних грешака.Калибрација према ИСО 8655 мора се вршити једном годишње.
- Пипете са позитивним померањем: Проверите да ли у вашој лабораторији имате пипету са позитивним померањем са малим опсегом запремине.Генерално, коришћење ове врсте пипета доводи до бољег резултата пипетирања у смислу тачности и прецизности него код класичних пипета са ваздушним јастуком.
- Покушајте да користите веће количине: Можете размислити о разблажењу узорка да бисте пипетирали веће количине са истом количином у финалној реакцији.Ово може смањити грешке пипетирања са веома малим запреминама узорка.
Поред доброг алата, истраживач мора имати веома добру технику пипетирања.Обратите посебну пажњу на следеће кораке:
- Причвршћивање врха: Немојте заглављивати пипету на врх јер то може оштетити крај финог врха, узроковати преусмеравање снопа течности или оштетити отвор.Притискајте само лагано када причвршћујете врх и користите пипету са конусом врха са опругом.
- Држање пипете: Немојте држати пипету у руци док чекате центрифугу, циклер итд. Унутрашњост пипете ће се загрејати и довести до ширења ваздушног јастука, што ће довести до одступања од подешене запремине приликом пипетирања.
- Претходно влажење: Влажење ваздуха унутар врха и пипете припрема врх за узорак и избегава испаравање приликом усисавања преносне запремине.
- Вертикална аспирација: Ово је веома важно при руковању малим количинама како би се избегао капиларни ефекат који се јавља када се пипета држи под углом.
- Дубина урањања: Потопите врх што је мање могуће како бисте спречили да течност уђе у врх због капиларног ефекта.Основно правило: што је мањи врх и запремина, то је мања дубина урањања.Препоручујемо максимално 2 мм при пипетирању малих количина.
- Дозирање под углом од 45°: Оптимални проток течности је загарантован када се пипета држи под углом од 45°.
- Контакт са зидом посуде или површином течности: Мале количине се могу правилно дозирати само када се врх држи уз зид посуде или уроњен у течност.Чак и последња кап са врха може се тачно дозирати.
- Издувавање: Издувавање је обавезно након испуштања малих количина да би се истакла и последња кап течности која се налази у врху.Издувавање такође треба извршити уз зид посуде.Пазите да не унесете мехуриће ваздуха у узорак када вршите издувавање на површини течности.
Време поста: 18. фебруар 2021