Kako pipetirati male količine pomoću ručnih ručnih pipeta

Kako se više pažnje stavlja na smanjenje reagensa i troškova, manje količine su u velikoj potražnji, npr. za pripremu PCR Mastermix-a ili enzimske reakcije.Ali pipetiranje malih količina od 0,2 – 5 µL postavlja nove izazove za tačnost i preciznost pipetiranja.Sljedeće tačke su bitne:

1. Veličina pipete i vrha: Uvijek birajte pipetu s najmanjom mogućom nominalnom zapreminom i najmanjim vrhom kako bi zračni jastuk bio što manji.Kada pipetirate 1 µL, npr. izaberite pipetu od 0,25 – 2,5 µL i odgovarajući vrh umjesto pipete od 1 – 10 µL.
2. Kalibracija i održavanje: Važno je da vaše pipete budu pravilno kalibrirane i održavane.Mala podešavanja i polomljeni delovi na pipeti dovode do ogromnog povećanja sistematskih i slučajnih grešaka.Kalibracija prema ISO 8655 mora se izvršiti jednom godišnje.
3. Pipete sa pozitivnim pomjeranjem: Provjerite imate li pipetu pozitivnog pomaka s malim opsegom volumena u vašoj laboratoriji.Općenito, korištenje ove vrste pipeta dovodi do boljeg rezultata pipetiranja u smislu tačnosti i preciznosti nego kod klasičnih pipeta sa zračnim jastukom.
4. Pokušajte koristiti veće količine: Možete razmisliti o razrjeđivanju uzorka kako biste pipetirali veće količine s istom količinom u konačnoj reakciji.Ovo može smanjiti greške pipetiranja s vrlo malim količinama uzorka.

Osim dobrog alata, istraživač mora imati vrlo dobru tehniku ​​pipetiranja.Obratite posebnu pažnju na sljedeće korake:

1. Pričvršćivanje vrha: Nemojte zaglavljivati ​​pipetu na vrh jer to može oštetiti kraj finog vrha, uzrokovati preusmjeravanje snopa tekućine ili oštetiti otvor.Pritiskajte samo lagano kada pričvršćujete vrh i koristite pipetu sa konusom na vrhu opruge.
2. Držanje pipete: Nemojte držati pipetu u ruci dok čekate centrifugu, cikler itd. Unutrašnjost pipete će se zagrijati i dovesti do širenja zračnog jastuka što će rezultirati odstupanjima od zadane zapremine prilikom pipetiranja.
3. Prethodno vlaženje: Ovlaživanje zraka unutar vrha i pipete priprema vrh za uzorak i izbjegava isparavanje prilikom aspiracije prijenosnog volumena.
4. Vertikalna aspiracija: Ovo je vrlo važno pri rukovanju malim količinama kako bi se izbjegao kapilarni efekat koji se javlja kada se pipeta drži pod uglom.
5. Dubina uranjanja: Uronite vrh što je manje moguće kako biste spriječili ulazak tekućine u vrh zbog kapilarnog efekta.Osnovno pravilo: što je manji vrh i zapremina, to je manja dubina uranjanja.Preporučujemo maksimalno 2 mm kod pipetiranja malih količina.
6. Doziranje pod uglom od 45°: Optimalni protok tečnosti je zagarantovan kada se pipeta drži pod uglom od 45°.
7. Kontakt sa zidom posude ili površinom tečnosti: Male količine se mogu pravilno dozirati samo kada se vrh drži uz zid posude ili uronjen u tečnost.Čak i posljednja kap sa vrha može se precizno dozirati.
8. Ispuhivanje: Izduvavanje je obavezno nakon ispuštanja malih količina kako bi se ispustila čak i posljednja kap tečnosti prisutna u vrhu.Izduvavanje takođe treba izvršiti uz zid posude.Pazite da ne unesete mjehuriće zraka u uzorak kada izvodite ispuhivanje na površini tekućine.